苦瓜籽中生物活性物质的分离纯化及表征

来源 :福州大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:jingliang2xx
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苦瓜籽粗提液分别经弱阴离子色谱柱(DEAE-650C)、弱阳离子色谱柱(CM-650M)交换后,得到一个具有抗真菌活性的蛋白MAP13。该蛋白经鉴定达到电泳纯,相对分子量约为12.7kDa左右。经还原剂处理后,电泳结果表明该蛋白由分子量分别为7kDa和6kDa的两个亚基组成,亚基之间通过二硫键连接。体外抑菌实验表明MAP13对苹果轮纹病菌(Physalospora piricola)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)、白菜黑斑病菌(Alternaria alternata(Fr.) Keissl)等真菌具有明显的抑制作用,对瓜果腐霉病菌的IC50为93.6μmol/L。MAP13的抑菌作用可能是通过破坏供试真菌的细胞壁来完成。通过二苯代苦味肼基(DPPH)自由基分光测定法的检测结果表明MAP13具有体外抗氧化活性,其IC50为20.9μmol/L。苦瓜籽粗提液通过Sephadex G75凝胶过滤、LUNA C18反相高效液相色谱分离得到活性组分P2,在C18反相柱上表现为单一的峰,经cLC毛细管液相色谱分析已达到很高的纯度。但通过MALDI-TOF MS测定表明P2主要由分子量为1533.54Da和1555.57Da的组分组成。P2具有体外抗真菌活性,对苹果轮纹病菌(Physalospora piricola)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)、菜豆根腐病菌(Fusarium solani)、葡萄灰霉(Botrytis cinerea)、甜瓜枯萎病菌( Fusarium oxysporum f.sp.nelonis )、白菜黑斑病菌( Alternaria alternata(Fr.) Keissl)、花生褐斑病菌(Mycosphaerella arachidicola)等真菌都有明显的抑制作用,对菜豆根腐病菌的IC50为18μg/mL。P2对真菌的抑制机理与MAP13不同,还有待进一步研究。体外细胞抑制实验表明P2对人肝癌细胞HepG2和狗肾上皮细胞MDCK具有明显的抑制活性。对HepG2细胞的的半数抑制浓度IC50为3.87μg/mL,对MDCK细胞的半数抑制浓度IC50为5.99μg/mL。在相同样品浓度下,对肝癌细胞HepG2的抑制能力要强于对狗肾上皮细胞MDCK,特别是在较低用药浓度下,其差异则更为明显。
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