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研究目的:通过研究柴朴汤对肝郁型哮喘大鼠mi R-21、PTEN表达及嗜酸性粒细胞凋亡的影响,从而探讨柴朴汤防治肝郁型哮喘的机制与mi R-21、PTEN及嗜酸性粒细胞凋亡之间的关系。研究方法:1)70只雄性SD大鼠随机原则分为肝郁组(n=30)与非肝郁组(n=40),肝郁组大鼠于第1~28天进行慢性不可预见性应激刺激,非肝郁组不做任何处理。造模结束后检测肝郁组与非肝郁组大鼠体重变化、糖水消耗量、血液肾上腺皮质激素(ACTH)含量,评价肝郁型模型。造模成功后将肝郁组与非肝郁组每10只分为一组一共7组,非肝郁组分为对照组、正常中药组、哮喘组、哮喘治疗组,肝郁组分为肝郁哮喘组、肝郁哮喘治疗组、地塞米松组。哮喘组、哮喘治疗组、肝郁哮喘组、肝郁哮喘治疗组、地塞米松组5组采用用卵蛋白(OVA)诱导复制哮喘模型。自雾化致敏大鼠造模开始,每次雾化吸入致敏剂前30 min,各组大鼠均予以胃内注药处理。正常中药组、哮喘治疗组、柴朴汤组予以柴朴汤颗粒(每克颗粒含生药18.5g)350 mg/kg灌胃;地塞米松组大鼠予以地塞米松1 mg/kg灌胃;正常对照组、哮喘模型组、肝郁哮喘组3组大鼠予以等量生理盐水处理。干预结束后,根据各组大鼠的症状及体征进行评分;肺功能测定,小动物呼吸机测定各组大鼠在不同浓度乙酰胆碱激发下测定的气道阻力;苏木素-伊红染色观察各组大鼠气道及肺组织病理改变;涂片法测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞、嗜酸性粒细胞数,嗜酸性粒细胞比例;用流式细胞计数测定支气管灌洗液EOS凋亡率;荧光实时定量PCR检测血液及肺组织mi R-21水平表达;蛋白质免疫印迹(Western-blot)和RT-PCR检测肺组织表达PTEN及PTEN m RNA水平。结果:1、肝郁模型的鉴定:1)体重比较:肝郁组体重286.69±7.36(g)造模结束后较对照组233.46±8.52(g)明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);2)肝郁组糖水消耗量8.41±0.79(ml)造模结束后较对照组19.42±0.86(ml)明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);3)正常对照组血浆ACTH含量709±263(ng/L)造模结束后较肝郁组1768±256(ng/L)明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);2、各组大鼠症状评分及肺功能结果:哮喘组和肝郁哮喘组大鼠支气管症状评分及肺功能测定气道阻力高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);肝郁哮喘高于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘治疗组低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.05);肝郁哮喘治疗组、地塞米松组均低于肝郁哮喘组,,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘治疗组、肝哮治疗组及地塞米松组之间无明显统计学差异,差异无统计学意义(P>0.05);支气管肺泡灌洗液细胞分类计数白细胞细胞总数、嗜酸性粒细胞总数、及嗜酸性粒细胞百分比哮喘组与肝郁哮喘组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);其中肝郁哮喘组高于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘治疗组低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.05);肝郁哮喘治疗组、地塞米松组均低于肝郁哮喘组,,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘治疗组、肝哮治疗组及地塞米松组之间无明显统计学差异(P>0.05)。支气管肺组织HE染色可见:正常对照组、正常中药组支气管肺组织结构正常完整,未见炎症细胞浸润,支气管壁厚度正常;哮喘组:大量粘液栓,镜下黏膜上皮局部脱落,基底层膜增厚及玻璃样变,粘膜下水肿,粘液腺增生。杯状细胞增多,平滑肌增生肥大,可见平滑肌破坏断裂,在管壁及粘液栓中可见嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润。相对于哮喘组肝郁哮喘炎症反应及气道重塑更为严重;余各组支气管肺组织病理改变明显轻于哮喘模型组及肝郁哮喘组。3、各组大鼠肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞凋亡率哮喘组(4.20±0.41)及肝郁哮喘组(4.29±0.28)嗜酸性粒细胞凋亡率较对照组(5.82±0.48)明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);哮喘组(4.20±0.41)与肝郁哮喘组(4.29±0.28)差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘治疗组(15.74±0.34)嗜酸性粒细胞凋亡率高于哮喘组(4.20±0.41),差异具有统计学意义(P<0.05),肝哮治疗组(15.77±0.42)及地塞米松组(15.43±0.55)嗜酸性性粒细胞凋亡率明显高于肝哮治疗组,差异具有统计学意义(P<0.05),哮喘治疗组、肝哮治疗组及地塞米松组之间无明显统计学差异(P>0.05)。4、各组大鼠血液及肺组织中mi R-21的相对表达量哮喘组、肝郁型哮喘组血液和肺组织mi R-21的相对表达量明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);肝郁哮喘组血液和肺组织mi R-21相对表达量高于哮喘组,差异具有统计学意义(P<0.05);哮喘治疗组血液和肺组织mi R-21相对表达量低于哮喘组,差异具有统计学意义(P<0.05);肝哮治疗组及地塞米松组均低于肝郁哮喘组,差异具有统计学意义(P<0.05);哮喘治疗组、肝哮治疗组、地塞米松组差异无统计学意义(P>0.05)。5、各组大鼠肺组织PTENm RNA、PTEN蛋白的相对表达量哮喘组及肝郁哮喘组肺组织PTENm RNA及蛋白相对表达量低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);哮喘组表达高于肝郁型哮喘组,哮喘治疗组表达高于哮喘组(P<0.05),差异具有统计学意义;肝哮治疗组及地塞米松高于肝郁哮喘组(P<0.05),差异具有统计学意义;哮喘治疗组、肝哮治疗组、地塞米松组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1、肝郁型哮喘大鼠血液mi R-21表达增加,且与哮喘的症状、炎症反应程度呈正相关,mi R-21可能作为哮喘控制水平的一个重要指标;2、柴朴汤在治疗肝郁型哮喘过程中可以通过抑制mi R-21的表达、上调的PTEN表达,从而促进嗜酸性粒细胞的凋亡,可能通过抑制mi R-21-PTEN通路导致嗜酸性粒细胞凋亡。