血根碱对HUVEC细胞的抑制作用及机理研究

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[目的]探索血根碱对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的抑制作用及机理,为血根碱的抗血管生成作用提供实验依据和理论基础,探索血根碱用于抗肿瘤生长和转移的可能机制。[方法]培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并将其分为对照组、血根碱组,对照组应用生理盐水处理,血根碱组分别应用1.00 μmol/L、2.00 μmol/L、3.00 μmol/L、4.00 μmol/L浓度的血根碱处理,48h后应用MTT法、细胞小管形成实验研究血根碱对HUVEC细胞增殖、小管形成作用的影响。流式细胞仪和Western blot法检测1.00 μmol/L、2.00 μ mol/L血根碱浓度组细胞周期、凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及血小板反应素-1(thrombspondin-1,TSP-1)的表达。[结果]1.血根碱可显著抑制HUVEC细胞增殖,并与剂量呈正相关。与对照组相比,各浓度血根碱组均可显著抑制HUVEC细胞的生长,差异具有统计学意义(P<0.05)。随血根碱浓度增加,细胞生长抑制率增大,抑制率与浓度呈正相关,相关系数R=0.067(P<0.05)。计算血根碱的 IC50 值为 2.0366 μ mol/L。2.血根碱可显著抑制HUVEC细胞增殖,在一定范围内呈时间依赖性。随着血根碱作用时间的延长,细胞增殖抑制作用增强,48h抑制作用达到高峰,72h与48h相比,细胞增殖抑制作用无显著差异(P>0.05)。3.血根碱可促进HUVEC细胞的凋亡,与对照组相比,1.00 μmol/L、2.00 μmol/L血根碱浓度组均可显著增加HUVEC细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.血根碱可影响HUVEC细胞周期,与对照组相比,2.0 μ mol/L血根碱组G1期细胞百分比降低,S期细胞百分比升高,差异具有统计学意义(P<0.05);1.0μmol/L浓度组与对照组相比,细胞各周期百分比无明显差异(P>0.05)。5.血根碱对HUVEC细胞Bax、Capase-3及TSP-1蛋白表达的影响:与对照组相比,血根碱 1.0 μ mol/L、2.0 μ mol/L 组 HUVEC 细胞 Caspase-3,TSP-1 表达均显著提高,2.0μg/ml组Bax表达显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]血根碱通过上调Bax、Caspase-3及TSP-1的表达,抑制HUVEC细胞的增殖,促进HUVEC细胞凋亡,抑制新生血管形成,发挥抗血管生成的作用。
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