论文部分内容阅读
目的:研究钙敏感受体(Calcium-sensing receptor,Ca SR)在创伤性脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)后大鼠神经元中的表达,分析Ca SR及Caspase-3表达的变化与神经元凋亡之间的关系。方法:健康成年清洁级SD大鼠54只,按随机数字方法随机分成对照组、TBI组、抑制剂组,每组18只,每组再分为损伤后6h、24h、72 h 3个亚组,每个亚组6只。对照组给予只开骨窗不予打击处理,TBI组和抑制剂组采用改良自由落体硬脑膜撞击法建立TBI模型,抑制剂组在模型建立前连续2 d尾静脉注射Ca SR阻滞剂NPS2390(1次/d,每次10μmol/kg)。采用改良神经功能评分(m NSS)评估各组大鼠神经行为,Real-Time PCR检测损伤脑组织Ca SR、Caspase-3 m RNA的表达,Western-blot法检测Ca SR、Caspase-3蛋白的表达,Tunel法检测皮质神经元的凋亡。采用单因素方差分析对数据进行分析。结果:(1)HE染色结果显示,对照组可见脑组织结构完整,细胞排列整齐,TBI组和抑制剂组可见蛛网膜下腔出血,炎性细胞浸润。(2)神经行为学评分显示:各时间点TBI组与对照组比较m NSS评分增高,差异有统计学意义(P<0.01),而三个时间点抑制剂组m NSS评分均低于TBI组(P<0.01)。(3)TBI组不同时间点Ca SR m RNA及其蛋白的表达,均为24 h达高峰,组内比较差异有统计学意义(P<0.01)。三个时间点TBI组Ca SR m RNA及其蛋白的表达高于对照组(P<0.05),而抑制剂组Ca SR m RNA及其蛋白的表达均低于TBI组(P<0.05)。各时间点TBI组Caspase-3 m RNA及其蛋白的表达在24 h达到高峰,组内比较差有统计学意义(P<0.05),各时间点TBI组Caspase-3 m RNA及其蛋白的表达高于对照组(P<0.05),抑制剂组Caspase-3 m RNA转录低于TBI组(P<0.05),抑制剂组仅在在24h时间点Caspase-3蛋白表达与TBI组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。(4)TUNEL法检测结果显示,TBI组24 h凋亡细胞达到峰值,组内比较差异有统计学意义(P<0.01)。各时间点TBI组比对照组神经元凋亡细胞指数均增高(P<0.01),而抑制剂组与TBI组比较,凋亡细胞指数降低(P<0.01)。(5)相关性分析显示:Ca SR、Caspase-3蛋白的表达均与细胞凋亡存在正相关(r=0.300,P<0.05;r=0.371,P<0.01),Ca SR蛋白的表达与Caspase-3蛋白的表达存在正相关(r=0.434,P<0.01)。Ca SR、Caspase-3 m RNA转录与细胞凋亡存在正相关(r=0.641,P<0.05;r=0.893,P<0.01);Ca SR m RNA转录与Caspase-3 m RNA转录存在正相关(r=0.754,P<0.01)。结论:在创伤性脑损伤中,Ca SR在脑损伤中表达明显增高,抑制剂NPS2390能下调Ca SR的表达,改善神经行为学评分,减少细胞凋亡。Ca SR的表达可能参与了创伤性脑损伤的病理生理过程。