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目的:通过对正常大鼠、抑郁模型大鼠及对此模型大鼠连续72 h快眼动睡眠剥夺(REMSD)和REMSD后恢复睡眠24 h大鼠脑内背缝神经核(DRN)、海马齿状回(DG)和杏仁核(CeA)各脑区腺苷A1和A2A受体mRNA水平的对比研究,探讨腺苷及其受体在抑郁症发病以及REMSD抗抑郁机制中的作用。
方法:实验动物为Sprague Dawley2-3月龄雄性大鼠,随机分为正常对照组(n=8,以下称正常对照组)、应激造模组(n=32)。应激造模组采用慢性轻度不可预见性应激(CMUS)和分养两种经典模型结合的方式来建立抑郁模型,采用随机区组法把造模成功大鼠分为4组:抑郁模型组(n=8,以下称抑郁模型组)、抑郁模型+72 h REMSD 组(n=8,以下称睡眠剥夺组)、抑郁模型+水环境对照组(n=8,以下称水环境对照组)、抑郁模型+72h REMSD+恢复睡眠24 h组(n=8,以下称恢复睡眠组)。利用小平台水环境法对抑郁模型大鼠进行快眼动睡眠剥夺,并用大平台水环境做对照。观察抑郁模型大鼠、快眼动睡眠剥夺处理后,及再恢复睡眠后大鼠自发活动的变化。原位杂交方法检测各组大鼠背缝神经核(DRN)、海马齿状回区(DG)、中央核群杏仁核(CeA)各脑区腺苷A1和A2A受体mRNA表达的变化。实验结果用Excel 2000和SPSS 13.0 统计软件进行分析处理。结果以均数±标准差(x_±s)表示,采用单因素方差分析(ANOVA)和t 检验(T-test)进行组间均数比较, P<0.05 为差异显著。
结果:⑴开场实验自发活动总路程: 大鼠经过21天CMUS处理后,自发活动总路程较正常对照组显著减少( P<0.05);抑郁模型大鼠经过72h REMSD后,自发活动总路程与水环境对照组相比显著增加( P<0.01),REMSD大鼠经过24 h恢复睡眠后,自发活动总路程较睡眠剥夺组大鼠减少( P<0.05)。⑵腺苷A1受体mRNA表达变化:① 21天CMUS后,大鼠DRN腺苷A1受体mRNA水平与正常对照组相比上升( P<0.05);72 hREMSD使抑郁模型大鼠DRN腺苷A1受体mRNA下降,但未达统计学意义( P>0.05);24 h恢复睡眠后与72 h REMSD相比升高有差异( P<0.05);72 h 水环境处理对抑郁模型大鼠DRN腺苷A1受体mRNA 转录水平没有影响( P>0.05)。② 21天CMUS后,大鼠DG腺苷A1受体mRNA水平与正常对照组相比显著上升( P<0.01);72 h REMSD与抑郁模型组相比下降( P<0.05),72 h REMSD与72 h 水环境处理相比有差别( P<0.05);24h恢复睡眠后与72hREMSD相比升高,但未达差统计学差异( P>0.05)。③ 21 天CMUS后,大鼠CeA腺苷A1受体mRNA水平与正常对照组相比下降,但未达统计学意义( P>0.05);72 h REMSD后与抑郁模型组相比明显升高( P<0.01);72hREMSD与72h水环境本身有明显差异( P<0.01);24h恢复睡眠后与72 h REMSD相比升高有差异( P<0.01)。⑶腺苷A2A受体mRNA表达变化:① 21 天CMUS后,大鼠DRN腺苷A2A受体mRNA水平与正常对照组相比明显降低( P<0.01);72 h REMSD后A2A受体mRNA表达与抑郁模型组相比升高( P<0.05);72 h 水环境处理与REMSD组大鼠相比有明显差异( P<0.05);24h恢复睡眠后与72hREMSD相比下降有差异( P<0.05)。② 21 天CMUS后DG腺苷A2A受体mRNA水平无明显变化( P>0.05),72hREMSD后大鼠DG腺苷A2A受体mRNA水平与抑郁模型组相比显著升高( P<0.01), 24h恢复睡眠后无显著下降( P>0.05);72h水环境处理与REMSD组大鼠相比有差异( P<0.05)。③ 21天CMUS后,大鼠CeA腺苷A2A受体mRNA水平与正常对照组相比显著上升( P<0.01);72 h REMSD对比抑郁大鼠A2A受体mRNA水平下降,但无明显意义( P>0.05);24h恢复睡眠后CeA腺苷A2A受体mRNA水平对比REMSD组大鼠明显上升( P<0.01);72h水环境处理与REMSD组大鼠相比无明显差异( P>0.05)。
结论:⑴21天CMUS可导致大鼠行为性抑郁;72hREMSD可快速缓解抑郁状态;而恢复睡眠24 h后大鼠抑郁症状复发。⑵21天CMUS后大鼠DRN和DG区腺苷A1受体mRNA上升,CeA区下降;DRN区腺苷A2A受体表达下降,CeA区上升,而DG无明显变化。这可能是慢性应激对大脑不同脑区作用不同所致;腺苷A1受体和A2A受体在CUMS后作出不同的反映,与A1和A2A受体的作用不同有关。⑶72hREMSD后抑郁模型组大鼠DRN(无统计学差异)和DG区A1受体mRNA表达下降,CeA区上升;而A2A受体mRNA表达在DRN和DG区上升,CeA区下降(无统计学差异);水环境对照在DRN A1受体mRNA和CeA区A2A受体mRNA表达变化上与REMSD组相比无差异,其余相比REMSD组都有差异。说明REMSD本身基本可引起行为学及神经生物水平上的改变而发挥抗抑郁的效果。⑷24h的睡眠恢复可逆转REMSD 对抑郁大鼠DRN 及CeA 区A1受体和A2A受体mRNA的作用。进一步证实A1受体和A2A受体mRNA可能参与REMSD抗抑郁的作用,及睡眠调节作用。
方法:实验动物为Sprague Dawley2-3月龄雄性大鼠,随机分为正常对照组(n=8,以下称正常对照组)、应激造模组(n=32)。应激造模组采用慢性轻度不可预见性应激(CMUS)和分养两种经典模型结合的方式来建立抑郁模型,采用随机区组法把造模成功大鼠分为4组:抑郁模型组(n=8,以下称抑郁模型组)、抑郁模型+72 h REMSD 组(n=8,以下称睡眠剥夺组)、抑郁模型+水环境对照组(n=8,以下称水环境对照组)、抑郁模型+72h REMSD+恢复睡眠24 h组(n=8,以下称恢复睡眠组)。利用小平台水环境法对抑郁模型大鼠进行快眼动睡眠剥夺,并用大平台水环境做对照。观察抑郁模型大鼠、快眼动睡眠剥夺处理后,及再恢复睡眠后大鼠自发活动的变化。原位杂交方法检测各组大鼠背缝神经核(DRN)、海马齿状回区(DG)、中央核群杏仁核(CeA)各脑区腺苷A1和A2A受体mRNA表达的变化。实验结果用Excel 2000和SPSS 13.0 统计软件进行分析处理。结果以均数±标准差(x_±s)表示,采用单因素方差分析(ANOVA)和t 检验(T-test)进行组间均数比较, P<0.05 为差异显著。
结果:⑴开场实验自发活动总路程: 大鼠经过21天CMUS处理后,自发活动总路程较正常对照组显著减少( P<0.05);抑郁模型大鼠经过72h REMSD后,自发活动总路程与水环境对照组相比显著增加( P<0.01),REMSD大鼠经过24 h恢复睡眠后,自发活动总路程较睡眠剥夺组大鼠减少( P<0.05)。⑵腺苷A1受体mRNA表达变化:① 21天CMUS后,大鼠DRN腺苷A1受体mRNA水平与正常对照组相比上升( P<0.05);72 hREMSD使抑郁模型大鼠DRN腺苷A1受体mRNA下降,但未达统计学意义( P>0.05);24 h恢复睡眠后与72 h REMSD相比升高有差异( P<0.05);72 h 水环境处理对抑郁模型大鼠DRN腺苷A1受体mRNA 转录水平没有影响( P>0.05)。② 21天CMUS后,大鼠DG腺苷A1受体mRNA水平与正常对照组相比显著上升( P<0.01);72 h REMSD与抑郁模型组相比下降( P<0.05),72 h REMSD与72 h 水环境处理相比有差别( P<0.05);24h恢复睡眠后与72hREMSD相比升高,但未达差统计学差异( P>0.05)。③ 21 天CMUS后,大鼠CeA腺苷A1受体mRNA水平与正常对照组相比下降,但未达统计学意义( P>0.05);72 h REMSD后与抑郁模型组相比明显升高( P<0.01);72hREMSD与72h水环境本身有明显差异( P<0.01);24h恢复睡眠后与72 h REMSD相比升高有差异( P<0.01)。⑶腺苷A2A受体mRNA表达变化:① 21 天CMUS后,大鼠DRN腺苷A2A受体mRNA水平与正常对照组相比明显降低( P<0.01);72 h REMSD后A2A受体mRNA表达与抑郁模型组相比升高( P<0.05);72 h 水环境处理与REMSD组大鼠相比有明显差异( P<0.05);24h恢复睡眠后与72hREMSD相比下降有差异( P<0.05)。② 21 天CMUS后DG腺苷A2A受体mRNA水平无明显变化( P>0.05),72hREMSD后大鼠DG腺苷A2A受体mRNA水平与抑郁模型组相比显著升高( P<0.01), 24h恢复睡眠后无显著下降( P>0.05);72h水环境处理与REMSD组大鼠相比有差异( P<0.05)。③ 21天CMUS后,大鼠CeA腺苷A2A受体mRNA水平与正常对照组相比显著上升( P<0.01);72 h REMSD对比抑郁大鼠A2A受体mRNA水平下降,但无明显意义( P>0.05);24h恢复睡眠后CeA腺苷A2A受体mRNA水平对比REMSD组大鼠明显上升( P<0.01);72h水环境处理与REMSD组大鼠相比无明显差异( P>0.05)。
结论:⑴21天CMUS可导致大鼠行为性抑郁;72hREMSD可快速缓解抑郁状态;而恢复睡眠24 h后大鼠抑郁症状复发。⑵21天CMUS后大鼠DRN和DG区腺苷A1受体mRNA上升,CeA区下降;DRN区腺苷A2A受体表达下降,CeA区上升,而DG无明显变化。这可能是慢性应激对大脑不同脑区作用不同所致;腺苷A1受体和A2A受体在CUMS后作出不同的反映,与A1和A2A受体的作用不同有关。⑶72hREMSD后抑郁模型组大鼠DRN(无统计学差异)和DG区A1受体mRNA表达下降,CeA区上升;而A2A受体mRNA表达在DRN和DG区上升,CeA区下降(无统计学差异);水环境对照在DRN A1受体mRNA和CeA区A2A受体mRNA表达变化上与REMSD组相比无差异,其余相比REMSD组都有差异。说明REMSD本身基本可引起行为学及神经生物水平上的改变而发挥抗抑郁的效果。⑷24h的睡眠恢复可逆转REMSD 对抑郁大鼠DRN 及CeA 区A1受体和A2A受体mRNA的作用。进一步证实A1受体和A2A受体mRNA可能参与REMSD抗抑郁的作用,及睡眠调节作用。