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目的涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）过去称“圆柱瘤”,是口腔颌面部常见的恶性肿瘤。严重危害患者的生命健康。约占全部涎腺涎腺肿瘤的9.95%,占涎腺恶性肿瘤的24%,平均为第二位的涎腺恶性肿瘤。绝大多数发生于头颈部,身体其他部位极其少见。在头颈部,腺样囊性癌最常见腭部的小唾液腺及腮腺,第二位好发生者为颌下腺。虽然舌下腺肿瘤发生率很低,一旦肿瘤发生首先考虑为腺样囊性癌。腺样囊性癌多见于中老年患者,高发年龄40—60岁。性别无明显差别。腺样囊性癌根据组织学形态可分为腺样、管状及实性型。空制复发和远处转移是临床治疗中的主要问题。而对涎腺腺样囊性癌肺转移的研究是学者们关注的热点。光镜下观察,肿瘤细胞可分为肌上皮细胞及导管上皮细胞,排列成圆形,卵圆型或不规则上皮团块。含有大小不等的囊腔,细胞核呈栅栏状排列在透明样物质中。腺样囊性癌手术中见瘤体大体上似与周围组织界限清楚,呈圆型或结节状。无包膜,质硬,剥面质地均匀,呈灰白色,浸润性极强,临近肿瘤的组织如肌肉、骨及骨膜等,肉眼观察近似正常组织而镜检常见癌细胞浸润。蛋白激酶是酶类这个家族中最庞大的一员,被用来完成蛋白磷酸化作用的催化,这是控制细胞生命活动中最通常的机制。其中最具有效性的蛋白激酶之一可能就是CK2。蛋白激酶CK2（protein kinase CK2,PKCK2）,过去曾经被称为酪蛋白激酶-2或Ⅱ（cascin kinase2 orⅡ）。它是由两个催化亚基（aa’）和两个调节亚基（ββ）构成的不均一四聚体。蛋白激酶CK2是由两个分别为42—44KDa和38KDa的aa’ββ型异四聚体结构。该结构很稳定,在体外只有在变性的条件下才能被解离。除了细胞基质,一些病毒蛋白也被CK2所磷酸化。蛋白激酶CK2在转录、信号、增殖,并且在导致肿瘤发生的各细胞步骤中发挥作用。有研究证实CK2不仅存在于细胞质和细胞核中,它几乎存在于细胞的每一部分。有学者指出蛋白激酶CK2的亚细胞定位决定了其功能。调控蛋白被激酶转译后的磷酸化是控制细胞复制和分化的机理。因而,蛋白激酶的调控障碍在细胞的异常生长和增殖中起到了重要作用,蛋白激酶CK2是这类激酶中的一种。很多证据显示这种蛋白激酶在肿瘤发生方面起重要作用。在所有肿瘤中蛋白激酶CK2能够随着肿瘤细胞的增殖而定量地增加。因此通过活性测定或免疫学识别方法,CK2被认为是一种肿瘤细胞的增殖标记。本实验首次通过免疫荧光技术研究蛋白激酶CK2-α’在同一来源不同转移能力的SACC细胞中的定位及表达,探讨蛋白激酶CK2-α’对SACC细胞肺转移能力的调控作用。为探讨蛋白激酶CK2-α’与腺样囊性癌发生肺转移的关系,本实验分别提取了SACC-LM及SACC-83两种细胞的细胞核和细胞质蛋白,应用Western blotting方法对其中的蛋白表达进行了检测,从而揭示蛋白激酶CK2-α’对腺样囊性发生肺转移的影响。蛋白激酶CK2-α’是否与腺样囊性癌的肺转移有关,目前尚无相关文献报道。实验方法1.细胞培养与细胞周期同步化SACC-83细胞系及SACC-LM细胞亚系用DEME培养基加10%（VOL/VOL）的56℃灭活的胎牛血清,滤膜除菌。细胞周期同步化在G1期末用aphidicolin（DMSO溶成为浓度2ug/ul）。在培养瓶中指数生长期的细胞稀释至2.5×105/ml加入aphidicolin,终浓度为1ug/ml培养液,37℃CO2培养箱中培养24小时后,用灭菌的PBS洗两次,后加入新鲜培养液。此时细胞停止在G1/S期。2.免疫荧光将本实验建立的G1/S期SACC-LM及SACC-83细胞,经爬片固定,细胞打孔后,用5%去脂奶粉阻断非特异性抗原,加抗PKCK2-α’抗体,4℃过夜,避光滴加荧光标记的二抗,各步骤之间均用缓冲液洗3次。阴性对照组省略第一抗体,用TBS缓冲液代替。复染核后50%甘油封片。照相。3.Western blotting将本实验建立的G1/S期SACC-LM及SACC-83细胞,PBS洗后离心,加入200ul的裂解液。超声粉碎后,12000×g,1小时后,4℃。分别提取核浆蛋白。吸取上清后,考马斯亮蓝测定法定量蛋白。10.5%SDS-PAGE电泳,BIORAD电泳板,双板条件为150V,30MA。后开始转印于硝酸纤维膜,经2小时50V的转印,TTBS洗膜3次,每次5分钟。后5%BSA封闭50分钟,其中时时振荡;封闭后TTBS洗2次,转到小鼠的单克隆抗体蛋白激酶CK2-α’（1:400）,4℃过夜。后TTBS洗2次,每次5分钟。转到辣根过氧化酶标记的马抗鼠中（1:5000）的二抗中,孵育2小时,后AP显色。实验结果1、蛋白激酶CK2—α’在SACC细胞中的表达蛋白激酶CK2—α’在SACC-LM及SACC-83细胞中存在表达,并突出定位于细胞核。2、蛋白激酶CK2—α’在SACC-LM及SACC－83细胞中的表达及对比（1）蛋白激酶CK2-α’在SACC-LM细胞及SACC-83细胞中的表达蛋白激酶CK2-α’在SACC-LM细胞细胞核中的表达高于在细胞质中的表达,而在SACC-83细胞细胞核中表达也高于在细胞质中的表达。（2）蛋白激酶CK2-α’在SACC-LM及SACC-83细胞中的表达对比蛋白激酶CK2-α’在SACC-LM细胞细胞核中的表达高于在SACC-83细胞细胞核中的表达,而在SACC-LM细胞细胞质中的表达也高于在SACC-83细胞细胞质中的表达。与SACC-83相比,SACC-LM细胞细胞核及细胞质中蛋白激酶CK2-a’都有较高表达。结论1、蛋白激酶CK2-α’在涎腺腺样囊性癌中高表达,与涎腺腺样囊性癌的发生有关。2、蛋白激酶CK2-α’在涎腺腺样囊性癌细胞中,尤其是在细胞核内的蛋白表达变化与涎腺腺样囊性癌的肺转移具有相关性。