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系统性红斑狼疮(SLE)是一种累及多系统、多器官的典型的自身免疫性疾病，其主要特点为淋巴细胞功能异常引起多种自身抗体的产生和免疫复合物的沉积。T细胞所参与的免疫应答是SLE机体整个免疫调节的核心。大量证据表明，T淋巴细胞尤其是CD4~+T细胞在SLE的发病中发挥重要作用。MRL／lpr和(NZB×NZW)F1两种狼疮模型小鼠具有多种与人类SLE相似的临床表现和病理生理学特征，因而常被用于研究人类SLE。 研究发现，CD4~+T细胞广泛浸润在受累组织中；去除CD4~+T细胞或MHCⅡ类分子基因敲除的MRL／lpr小鼠，可出现淋巴结病，但无自身抗体产生，且不出现狼疮肾炎表现；应用抗CD4单克隆抗体可改善两种狼疮模型鼠的发病症状。这些结果均表明CD4~+T细胞在狼疮鼠的发病中具有重要作用。但目前为止，克隆扩增并广泛浸润的致病性CD4~+T细胞克隆尚未被鉴定。SLE疾病中的抗原特异性T细胞的本质也尚不清楚。致病性CD4~+T细胞克隆的检出和鉴定将有利于阐明CD4~+T细胞克隆在SLE抗原特异性免疫反应中的作用，并有助于了解引起SLE发病的自身抗原的特点，从而为特异性免疫调节治疗提供靶点和新途径。本研究以致病性T细胞克隆为研究对象，通过对幼年未发病狼疮鼠和成年发病狼疮鼠的各脏器中浸润的T细胞克隆性的比较，发现广泛浸润的T细胞克隆，并分析其克隆扩增的特点及其细胞来源，进而通过对该细胞克隆TCR Vβ基因的测序，来分析其抗原特异性，从而揭示其在SLE中的致病作用及其所针对的自身抗原的结构特点，为特异性免疫调节治疗提供靶点和新途径。 采用RT-PCR-SSCP法分析MRL／lpr和(NZB×NZW)F1两种SLE模型小鼠各脏器中TCR Vβ1-19基因亚家族的表达及T细胞的克隆性；对广泛浸润在各脏器中的T细胞克隆的TCR Vβ6 CDR3片段进行DNA测序分析；并联合交叉应用磁珠细胞分离法、流式细胞仪细胞分选法和RT-PCR-SSCP分析法，来确定广泛浸润在各脏器中的T细胞表型。 本研究的主要结果如一F: 1.成年发病的MRL月pr和伽zBxNzw)Fl狼疮模型鼠中，存在广泛浸润在多脏器中的相同的T细胞克隆，以双肾、脑、肺、小肠及淋巴结最为明显，各周龄、各TCR vp亚家族中出现相同的T细胞克隆带的数量分别为:22周龄的MRL月Pr小鼠的TcR vpZ、TcR vp6、TcR vps.l、TeR vpls的T细胞中分别出现3条相同的克隆带，TeR vpl6中出现2条，兀Rv印。中出现4条:26周龄的MRL月pr小鼠的TcRv两中出现2条，TCR vp10中出现3条;40周龄的伽zBxNzW)FI小鼠的TCRV助和TCRv田中分别出现2条;47周龄的伽zB、Nz幼Fl小鼠的TcRv呀中出现1条，TcRv阶中出现3条。而幼年未发病狼疮鼠各脏器中虽可见T细胞克隆扩增带，但未见相同的T细胞克隆。 2.克隆扩增的T细胞呈TcR vp限制性:此广泛浸润的共同的T细胞克隆呈TcR vp限制性扩增，即TCR vp基因存在优势取用:MRLllPr发病鼠存在v阳，v陌，v阶.1，v印0，vp16，v印8的优势取用，困zBxNz钧Fl发病鼠仅存在v时和vp7基因的优势取用。 3.克隆扩增广泛浸润的T细胞为cD4+T细胞:c以+T细胞去除的细胞群及cD4+T细胞和CDS+T细胞都去除的细胞群中，此共同浸润的T细胞克隆电泳带大多消失，而单纯CDS+T细胞去除的细胞群中，此电泳带仍然存在。表明该两种狼疮发病鼠中克隆扩增并广泛浸润的T细胞来源于CD4十T细胞。 4.克隆扩增并广泛浸润的T细胞为CD4+ CD69+T细胞:用队CS方法分选47周龄成年发病的困zBxNzw)FI小鼠右侧肾脏中的eo4+en69+T细胞，经Rl;peR·sseP法分析，发现CD4+ CD69+T细胞与左侧肾脏及其它脏器的总体T细胞存在相同的克隆扩增带，表明此克隆扩增并广泛浸润的T细胞为活化的T细胞表型-一一毛D4十cO69+T细胞。 5.成年发病狼疮鼠中TcRv郎亚家族CDR3片段编码的氨基酸序列特点:该广泛浸润的T细胞克隆的TcRv助cDR3片段，在不同个体的成年发病的狼疮鼠之间，存在相同的氨基酸基序:四个个体中都出现‘r即异亮氨酸;三个个体出现‘G’即甘氨酸;四个个体中都出现带阴离子电荷的酸性氨基酸，其中三个个体出现‘D’即天门冬氨酸，另外一个个体出现‘E’即谷氨酸。提示该广泛浸润的T细胞克隆针对特定的自身抗原。 6.应用scion Imag。软件分析ssCP胶片上肾脏或脑组织中的各条电泳带的密度分布比例。分析所得出的J‘一泛扩增的T细胞克隆在浸润于该组织中的T细胞总体中所占比例，分别与实际DNA测序所得的比例相比，结果相近。表明实际的测序结果可靠。 一2-幻 本研究的主要结论为: 1 .MRL八Pr和困zBxNzw)F1两种狼疮模型鼠在sLE发病时，cD4+T细胞被活化、呈克隆性扩增，并厂‘泛浸润于多个脏器，表明其在狼疮肾炎和狼疮中枢神经系统损害的发病中发挥重要作用。 2.此广泛浸润的cD4+T细胞克隆来源于cD4十cD69+T细胞，其克隆扩增呈TcR vp限制性。 3.不同的狼疮模型鼠个体，在该特定的cD4+T细胞克隆的TcR vp基因c0R3区中存在相同的氨基酸基序，表明其识别某种特定的自身抗原，参与SLE的特异性免疫应答。 本研究的主要创新点为:选择性地以狼疮模型鼠的致病性T细胞为研究对象，并非研