嗜铬细胞瘤切除术中血压心率变化分析和肿瘤基因表达的特点

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目的:1 分析嗜铬细胞瘤切除术中病人血压、心率和儿茶酚胺变化的特点,并分析影响嗜铬细胞瘤切除术中病人血压、心率和儿茶酚胺变化的因素;2 比较嗜铬细胞瘤和瘤旁组织mRNA表达的差异,分析差异表达片段与嗜铬细胞瘤切除术中血压、心率和儿茶酚胺变化之间的关系。 方法:选择择期行嗜铬细胞瘤切除术病人14例,收集手术前病历资料,标准化麻醉方法,连续监测和记录手术中的血压和心率的变化,并分别于麻醉诱导后手术开始之前、手术开始切皮时、手术中挤压肿瘤时和肿瘤切除后即刻中心静脉取血,测定儿茶酚胺浓度;肿瘤切除之后,采集肿瘤和肿瘤旁的组织,用差异显示聚合酶链式反应、分子克隆和斑点杂交的方法克隆、定量差异显示的基因片段在不同组织中的表达。 计算手术中病人的收缩压、舒张压、平均动脉压和心率的均值和标准差,以及麻醉后手术开始之前、手术开始切皮时、手术中挤压肿瘤时、和肿瘤切除之后的收缩压、舒张压、平均动脉压和心率,比较各个时间点之间的差异。 提取肿瘤组织和瘤旁组织的总RNA,经过DNA酶处理之后用差异显示反转录聚合酶链式反应(DD-RT-PCR,differential display reverse transcription polymerase chain reaction)扩增所得的cDNA,经过3.5%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示差异表达的条带,切取差异显示的条带克隆到pGEM-T easy载体中,制备地高辛标记的探针,与总RNA进行斑点杂交,找出阳性克隆,进行测序,与Genbank、DDBJ和EMBL数据库中的已知序列进行比较明确是何基因表达片段;并用阳性克隆的探针对不同病人的嗜铬细胞瘤组织和瘤旁组织进一步进行斑点杂交,半定量它在不同病人和不同组织中的表达,分析差异表达的mRNA与手术中的收缩压、舒张压和心率之间的关系。 结果:麻醉诱导完成后,在没有任何刺激的情况下病人的血压和心率要比入室血压和心率明显降低;手术切除过程中,挤压肿瘤时血压显著高于病人入室血压;肿瘤切除之后血压显著下降,并且比手术开始之前还要低,心率与病人入室时和手术开始之前没有显著差异。 手术开始之后会引起去甲肾上腺素和肾上腺素的大量分泌,但不同的病人之
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