论文部分内容阅读
目的:环状RNA(circRNAs)在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。已有研究证实circ-FBXW7在人类肿瘤中表达量下降,在肿瘤的进展过程中有抑制作用,但是其在胃癌进展过程中所发挥的作用及相关机制尚未有文章阐述。本实验通过检测circ-FBXW7在胃癌细胞系以及胃癌患者组织中的表达水平,分析其表达水平与胃癌患者临床病理资料之间的关联。通过circ-FBXW7过表达和基因敲减研究对胃癌细胞体外的生物学作用的影响,探讨其在胃癌进展过程中发挥的作用机制,从而为胃癌的临床诊断和治疗提供新的方向。方法:1、实时荧光定量PCR检测circ-FBXW7在胃癌细胞及胃癌患者组织中的表达水平,分析其表达水平与患者的临床病理相关资料(年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移和TNM分期等)之间的相关性;评估circ-FBXW7作为胃癌临床诊断指标的潜在价值。2、采用circ-FBXW7过表达质粒与空白对照质粒、circ-FBXW7shRNA质粒与阴性对照shRNA质粒转染人胃癌细胞MGC-803和BGC-823,观察胃癌细胞增殖能力以及凋亡水平的变化,并采用qRT-PCR和western blot技术检测circ-FBXW7对细胞增殖和凋亡相关基因及蛋白表达的影响。3、观察circ-FBXW7过表达和干扰后胃癌细胞迁移、侵袭能力的变化,实时荧光定量PCR和western blot检测EMT相关基因的表达情况,分析相关信号通路相关活化变化情况,探讨circ-FBXW7在胃癌中发挥作用的分子机制。结果:1、实时荧光定量PCR检测结果表明circ-FBXW7在胃癌细胞及胃癌患者组织中的表达水平相对于对照组有明显下降趋势。而分析临床病理相关资料提示circ-FBXW7的表达水平与肿瘤大小、分化程度、肿瘤分期及Borrmann分型有明显相关性。2、Circ-FBXW7过表达组circ-FBXW7表达水平显著升高,而circ-FBXW7shRNA干扰胃癌细胞后circ-FBXW7表达水平显著降低。过表达circ-FBXW7诱导细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖能力,而敲减circ-FBXW7减少细胞凋亡,促进细胞增殖能力。Circ-FBXW7过表达抑制Bcl-2蛋白表达而促进PARP、caspase-3和P21蛋白表达,circ-FBXW7敲减则具有相反效果。3、细胞侵袭及迁移实验表明,circ-FBXW7的敲减后能够增强胃癌细胞迁移及侵袭能力,而circ-FBXW7过表达则可以减弱胃癌细胞侵袭及迁移能力。实时荧光定量PCR和western blot结果表明circ-FBXW7敲减或过表达影响胃癌细胞EMT相关基因和蛋白表达水平及TGF-β和Wnt信号通路的活化。结论:Circ-FBXW7在胃癌患者肿瘤组织中表达下调,且表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期显著相关;circ-FBXW7能通过促进细胞凋亡和逆转EMT发生,抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力;因此circ-FBXW7有望成为胃癌诊断和治疗的新靶点。