论文部分内容阅读
本研究将猪繁殖与呼综合征病毒ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF5)免疫BALB/c小鼠、仔猪和将猪白细胞介素-2真核表达质粒(pcDNA-IL-2)与pcDNA-PRRSV-ORF5联合免疫BALB/c小鼠后,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA试验分别对宿主的体液免疫和细胞免疫进行了检测。 将pcDNA-PRRSV-ORF5以不同免疫途径(基因枪和肌肉注射)免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的外周血中CD4~-、CD8~-T淋巴细胞数、T淋巴细胞的转化功能及小鼠血清中特异性PRRSV血清抗体IgG动态变化。结果表明,pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠后外周血对ConA有明显的反应性。实验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4~-T淋巴细胞数在免疫后7d高于对照组(P<0.01),CD8~-T淋巴细胞在免疫后28d高于对照组,不同途径基因疫苗免疫小鼠后均诱导小鼠产生PRRSV特异性IgG。在诱导细胞免疫方面,基因枪和肌肉注射各组间无明显差异;在诱导体液免疫方面,基因枪法优于肌肉注射。表明制备的pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的体液和细胞免疫应答,基因枪法较肌肉注射更能诱导体液免疫应答的产生。 将pcDNA-PRRSV-ORF5以50μg、100μg和200μg三种剂量肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的外周血中CD4~-、CD8~-T淋巴细胞数、T淋巴细胞的转化功能及小鼠血清中特异性PRRSV血清抗体IgG动态变化。结果表明,三个剂量的pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠后外周血都对ConA有明显的反应性,实验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4~-T淋巴细胞数在免疫后7d高于对照组(P<0.01),CD8~-T淋巴细胞在免疫后28d高于对照组,不同剂量pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠后均诱导小鼠产生PRRSV特异性IgG,大剂量基因疫苗免疫小鼠的体液免疫和细胞免疫应答高于中、小剂量。表明pcDNA-PRRSV-ORF5免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的体液和细胞免疫应答,并表现一定的剂量依赖性。 将pcDNA-PRRSV-ORF5和pcDNA-PRRSV-ORF5的联合免疫BALB/c小鼠,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA试验分别对其细胞免疫和体液免疫进行了检测。结果表明,pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-ORF5联合免疫小鼠后抗体水平和细胞免疫水平明显高于单独pcDNA-PRRSV-ORF5免疫,联合组与单独pcDNA-PRRSV-ORF5组比较有显著差异(P<0.01)。表明猪pcDNA-IL-2能够显著增强pcDNA-PRRSV-ORF5诱导小鼠体液免疫和细胞免疫的能力。 将pcDNA-PRRSV-ORF5以肌肉注射免疫仔猪,结果表明,pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫仔猪后外周血对ConA有明显的反应性,实验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4~-T淋巴细胞数高于对照组,差异极显著(P<0.01),CD8~-T淋巴细胞数在免疫仔猪后第7d和第75d差异不显著(P>0.05),在第15d至第60d差异极显著(P<0.01),pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫仔猪后诱导仔猪产生了PRRSV特异性抗体,与空载体及空白对照组相比,差异极显著(P<0.01)。表明pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗能够诱导仔猪产生良好的体液和细胞免疫应答,免疫期持续135d以上。