论文部分内容阅读
目的骨修复是一个复杂的过程,生长因子在骨修复中有着重要的作用。富血小板血浆（PRP）是自体血小板的浓缩体,具有制备简便、价格低廉、自体、无毒、无免疫原性的优点,而且PRP中释放的多种生长因子可能符合人体生长因子的配比,因此PRP被视为较为理想的符合临床应用需要的生长因子来源。防治创伤后骨与软组织感染是一个较棘手的问题。常规处理是清创术后全身应用广谱抗生素,在开放性骨折中,由于血运障碍、骨与软组织失活,全身应用抗生素时,骨折局部抗生素浓度往往低于血药浓度,疗效较差而副作用大。局部应用抗生素可在局部获得较高药物浓度,同时保持较低的血药浓度,增强杀菌作用而减少抗生素毒副作用。本研究通过体外实验和动物感染性骨缺损模型初步探讨是否能将PRP与抗生素复合,利用二者的优点,达到促进骨折愈合和抗感染的作用。方法1、对比不同离心条件对PRP制备影响,确定PRP理想制备条件。取健康白兔四只,雌雄不限,体重3-3.5Kg。用预置抗凝剂的真空采血管由耳背中央动脉抽血,按照一定条件离心。用全自动血细胞分析仪测定离心液中血小板浓度,找到一个相对低速、短时的离心条件,并使PRP达到5-6倍浓缩率。2、使用凝血酶-钙剂激活血小板,制备富血小板凝胶和庆大霉素-富血小板凝胶,PBS液室温培养,用ELISA试剂盒测定、比较不同时点培养液中PDGF,TGF量,判定复合抗生素后是否影响PRP生长因子的释放;用紫外分光光度法测定不同时点培养液中庆大霉素含量,判定载药凝胶是否有缓释作用。3、参照沈霖的慢性骨髓炎造模方法,使用金黄色葡萄球菌建立兔胫骨慢性骨髓炎模型,对以建立的模型手术清创,植入富血小板凝胶或庆大霉素-富血小板凝胶,并同空白对照比较,肉眼观察比较一般状况,X-ray检查,病理学检查,判定骨缺损愈合情况结果1、初次离心使红细胞与富含血小板的血浆分离,B4、C2的血小板收集率回收率均＞80%;再次离心使血小板充分沉淀于离心管的底部,上清液为PPP,弃去大部分PPP,得到约0.5mlPRP,K2和K3条件下血小板浓缩率达到六倍以上。2、PRP在凝血酶和CaCl2的作用下活化并形成凝胶,释放PGDF和TGF,添加庆大霉素对这两种生长因子的释放没有明显影响。3、庆大霉素-富血小板凝胶在体外环境下可以持续释放庆大霉素超过两周,第二天释放达到峰值,而后逐渐下降,在第14天,释放浓度仍可以达到16ug/ml。4、PRG治疗侧的感染性骨缺损在术后六周没有愈合,应有庆大霉素-富血小板凝胶的一侧骨缺损已经基本愈合。结论1、二次离心法,初次离心条件:1400rpm,10min,再次离心条件:1400rpm,15min可稳定获得浓缩率大于6倍的PRP,是实验研究PRP时的理想制备条件。2、富血小板凝胶和庆大霉素-富血小板凝胶的生长因子释放无明显差异;3、富血小板凝胶具有缓释作用,PDGF、TGF、庆大霉素可持续释放超过7天。4、庆大霉素-富血小板凝胶能够有效地促进兔胫骨感染性骨缺损愈合。