粟酒裂殖酵母新的snoRNAs的鉴定和分析

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该论文以粟酒裂殖酵母为材料,通过实验的方法,在已构建文库的基础上,通过文库筛选、DNA测序获得13个新的box C/D类和3个新的box H/CA类的snoRNAs,并通过设计牧民性的引物对其中四个boxC/D分子进行northern印迹杂交和RT的鉴定,证实它们都是稳定存在的分子;同样利用northern印迹杂交的方法证实3个box H/CA类snoRNAs也都是稳定存在的分子.我们对所得到的新的snoRNAs进行功能和同源性分析并进行命名.在同源分析的基础上,从生物进化的角度对其中个别snoRNAs进行分析和讨论.最后,对U6 snRNA的修饰加工时序和运输过程进行了初步的探讨.该文利用粟酒裂殖酵母(schizosaccharomyces.pombe)U6 snRNA基因含有一个50bp内含的特性,通过割胶回收的方式,从总RNA中分离U6前体,通过高低两种浓度的逆转录来确定其上的2-O-核糖甲基化修饰位点.结果发现U6前体上无2-O-核糖甲基化修饰,对比成熟U6中四个2-O-核糖甲基化修饰位点,说明粟酒裂殖酵母U6 snRNA加工成熟是先经过剪接体中切去内含子,然后再被snoRNAs指导2-O-核糖甲基化修饰.这给人们研究U6 snoRNAs加工时序和细胞核内的运输过程提供了直接的实验证据.
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