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目的:孕激素膜受体1(PGRMC1)是脊椎动物的保守蛋白,广泛存在于真核生物中。PGRMC1异常高表达在卵巢癌发展中起重要作用。凋亡抑制蛋白Survivin在卵巢癌的发生中也有着一定的关系,目前关于二者在卵巢癌中的调控的研究目前尚未见报道。检测PGRMC1在卵巢癌组织中的表达情况。在OVCAR3细胞中下调PGRMC1的表达,观察高浓度孕激素作用于卵巢癌OVCAR-3后增殖情况,检测Survivin、PGRMC1mRNA表达情况,探讨PGRMC1在卵巢癌发生、发展过程中的作用,以及与Survivin的关系,为卵巢癌防治提供新的理论依据。 方法:(1)免疫组织化学染色(EnVision法)及Image-ProPlus图像分析软件,观察PGRMC1在卵巢浆液性囊腺癌组织、卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢交界性肿瘤和正常输卵管上皮组织中的表达情况。(2)以人卵巢浆液性囊腺癌细胞系OVCAR-3为研究对象,首先在37℃,5%CO2,20% O2和95%湿度条件下培养卵巢癌细胞,提取生长指数期细胞,且生长良好的细胞进行以下实验。实验分组:空白对照组(加入含有血清及双抗的培养基)、脂质体组(加入脂质体,余同空白组)、干扰1组(加入PGRMC1-SiRNA+余同空白组)、干扰2组(加入PGRMC1-SiRNA+MPA+余同空白组)、孕激素组(加入孕激素10-3mmol/l+余同空白组),培养细胞24小时后,MTT检测各组的OVCAR3细胞的增殖情况,RT-PCR检测PGRMC1、Survivin的mRNA相对表达情况。(3)卡方检验判断PGRMC1表达与各个临床病理指标的相互关系,各组数据以错误!未找到引用源。表示,多组间均数比较采用方差分析;随访材料的患者生存情况用Kaplan-Meier方法进行分析,生存率比较用Log-rank检验。P<0.05为差异有统计学意义。统计使用SPSS18.0软件处理。 结果:(1)PGRMC1在正常组、良性组、交界组、恶性组的阳性表达量(错误!未找到引用源。)为:0.018±0.008、0.021±0.007、0.032±0.010、0.047±0.019,恶性组的阳性表达量高于交界组、良性组、正常组,差异有统计学意义(P<0.05),交界组的阳性表达量高于正常组、良性组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。说明在PGRMC1的阳性表达量随着恶性增高而增高,有助于鉴别良恶性卵巢肿瘤。(2)PGRMC1在正常组、良性组、交界组、恶性组的阳性表达率为:20%(2/10)、30%(3/10)、50%(5/10)、72.5%(29/40)。恶性组的阳性表达率高于交界组、良性组、正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。交界组阳性表达率高于良性组、正常组,差异无统计学意义(P>0.05)。说明PGRMC1阳性表达率在恶性组表达多,有助于卵巢良恶性肿瘤的鉴别。(3)PGRMC1的表达与卵巢癌肿瘤大小、病理分级、临床分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05),与年龄(P>0.05)无关。提示肿瘤直径越大、病理分级越高、临床分期越晚、有淋巴结转移者,其PGRMC1的阳性表达率越高。(4)PGRMC1阳性表达率与卵巢浆液性囊腺癌的术后生存率(Log-rank=5.719;P=0.017)呈负相关,提示 PGRMC1阳性表达的患者,术后生存率较低。(5)OVCAR3细胞在空白组、脂质体组、干扰1组、干扰2组、孕激素组的增殖率为24.84±1.11、25.14±0.64、20.44±0.32、14.54±0.24、18.42±0.27。干扰1组、干扰2组、孕激素组的增殖率低于脂质体组,差别有统计学意义(P<0.05),说明孕激素、下调PGRMC1的表达后,能够抑制 OVCAR3的细胞存活。孕激素组的增殖率高于干扰2组,说明 PGRMC1-SiRNA能够抑制细胞的存活,PGRMC1能促进卵巢肿瘤细胞的增殖。(6)PCR结果提示:Survivin mRNA在空白组、脂质体组、干扰1组、干扰2组、孕激素组的相对表达含量分别为0.27±0.01、0.25±0.01、0.18±0.01、0.04±0.01、0.10±0.09。PGRMC1 mRNA在空白组、脂质体组、干扰1组、干扰2组、孕激素组的相对表达含量分别为0.26±0.04、0.20±0.06、0.14±0.02、0.05±0.01、0.13±0.04。脂质体组中Survivin、PGRMC1的mRNA与各个实验相比,P<0.05,差异有统计学意义。 结论: (1)PGRMC1在卵巢浆液性囊腺癌中高表达,有助于良恶性卵巢肿瘤的鉴别。 (2)PGRMC1的阳性表达与卵巢癌恶性程度有关,提示肿瘤体积越大、病理分级越高、临床分期越晚、有淋巴结转移者,则PGRMC1阳性表达越高。而且PGRMC1阳性表达者,术后生存率低,提示PGRMC1可能是卵巢癌预后的预测因素之一。 (3)沉默PGRMC1的表达后,可能通过下调Survivin的作用,抑制了肿瘤细胞增殖,促进凋亡,说明PGRMC1有助于卵巢癌的发展。