【摘 要】
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稻、麦等重要禾谷类作物的抗病基因的发掘与利用研究主要集中在病原菌生理小种专化的抗病基因上。由于这类基因的抗性容易因病原菌的演变而丧失抗性,近年来广谱抗性的研究引起
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稻、麦等重要禾谷类作物的抗病基因的发掘与利用研究主要集中在病原菌生理小种专化的抗病基因上。由于这类基因的抗性容易因病原菌的演变而丧失抗性,近年来广谱抗性的研究引起了广泛关注,但重点基本集中在葡聚糖酶基因上。关于稻、麦等重要禾谷类作物糖基转移酶(GTase)基因的功能及其与抗病性的关系,还非常缺乏研究。
本实验通过EST标签克隆技术从小麦抗白粉病种质中克隆到一个葡萄糖基转移酶基因TaGT214,通过基因差异表达、原核表达、生物信息学等技术初步研究其功能。主要研究内容及结果如下:
1.利用EST标签克隆技术从抗白粉病小麦品种Khapli中克隆得到了一个葡萄糖基转移酶基因,命名为TaGT214。
2.用半定量PCR技术,对该基因在白粉病菌、赤霉菌毒素、水杨酸、低温、干旱、伤口诱导下的差异表达进行系统比较,发现该基因受病原菌诱导大量表达。
3.构建原核表达载体,建立高效原核表达体系,优化融合蛋白分离纯化技术,发现将表达宿主菌改为Rossta(DE3)后表达效果明显改善,Ni-NTA纯化融合蛋白效果最佳。
4.通过比较白粉病菌密集侵染抗病、感病材料后次生代谢产物,发现感病材料次生代谢产物较抗病材料有一紫外下显蓝色荧光,氨熏后显黄绿色荧光物质,经柱层析分离纯化后,质谱、核磁共振及其理化实验结果分析得出该物质为苯丙素类物质—绿原酸。
5.通过生物信息学技术分析该基因的结构证实该基因与小麦抗病相关。
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