土木香内酯(alantolactone)和异土木香内酯(isoalantolactone)两个天然产物主要是从常用中草药土木香(Inula Helenium)中提取得到。2010版的《中国药典》记载土木香主要用于健脾和胃、行气止痛、安胎。现代药理学研究表明这两种单体化合物具有抗菌、驱虫、抗炎、抗肿瘤等生物活性。近年来的研究重点侧重于其抑制癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡及抗炎的生物活性及作用机制。过去,由于代谢物含量低,在分析过程中往往会被复杂的内源性物质及背景噪声所掩盖,所以对体内代谢物的鉴定工作一度进入瓶颈期,其中不饱和度低的萜类化合物更是如此。因此,对土木香内酯和异土木香内酯在体内的代谢物及代谢途径尚无系统的研究。在当前的研究中,能够触发信息依赖采集(Information Dependent Acquisition)扫描的实时多重质量亏损(Multiple Mass Defect Filter)和动态背景扣除(Dynamic Background Subtraction)在线技术成功地解决了这一难题。该项技术具有灵敏度高、分辨能力强的特点,能够精确地测定所有可能的代谢物的分子量并根据实验数据设置有选择的触发二级质谱扫描。本实验采用该技术,在UPLC-Triple TOF 5600+仪器上建立了一种具有普遍适用性的鉴定土木香内酯和异土木香内酯体内代谢物的方法,并将其应用于给药大鼠的尿液、胆汁、粪便及微生物转化的代谢物检测,根据代谢物推测可能的代谢途径。土木香内酯和异土木香内酯经大鼠肠道菌温孵得到的代谢物为大鼠体内代谢物的鉴定提供了理论依据。实验结果表明该实验方法可为其它α-亚甲基-γ-内酯类化合物的体内代谢物的检测提供模板依据,为土木香内酯和异土木香内酯的体内代谢过程和药理作用机制的阐明奠定基础。目的:用UPLC-Triple TOF-MS技术结合大鼠肠道菌代谢产物结构建立一种具有普遍适用性的土木香内酯和异土木香内酯体内代谢物的鉴定方法,对土木香内酯和异土木香内酯的大鼠尿液、胆汁、粪便及肠道菌转化中的代谢物进行鉴定,并推测其代谢途径。方法:1大鼠肠道菌代谢产物的制备:取大鼠新鲜粪便,加到厌氧培养液中培养30 min,再分别加入二者单体化合物,于37℃培养48 h,用等体积乙酸乙酯萃取3次,浓缩,残留物经柱色谱分离所得的流份经TLC检验,相同成分合并纯化后,经半制备HPLC分离得到代谢物单体。采用HRMS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HSQC、HMBC、NOESY等波谱学方法对其化学结构进行鉴定。2大鼠体内体外代谢物的鉴定:经过预处理的生物样品经过UPLC-Triple TOF-MS方法检测后,采用Metabolitepilot 1.5中的多种数据挖掘工具(提取离子色谱、质量亏损过滤、碎片离子过滤和中性丢失过滤)对代谢物数据进行快速准确的识别和提取。然后利用PeakView 2.0中的MasterView获得代谢物的精确质量数、分子式及二级质谱图。利用上述生物转化所得代谢物单体作为对照品,比对其与待鉴定化合物的保留时间和二级质谱图,确定代谢物结构。对没有对照品的代谢物,利用质谱信息与Chemspider数据库比对,对其结构进行推测。结果:经过UPLC-Triple TOF-MS方法检测,肠道菌代谢和灌胃给予土木香内酯单体的大鼠除母药外共检测到44个代谢产物,其中尿液中11个、胆汁中10个、粪便中38个、肠道菌代谢产物13个。肠道菌代谢和灌胃给予异土木香内酯单体的大鼠除母药外共检测到46个代谢产物,其中尿液中10个、胆汁中10个、粪便中39个、肠道菌代谢产物13个。其中共有44个新型含硫二聚体化合物未见报道。然而,检测中仅发现AL和iAL的半胱氨酸和N-乙酰半胱氨酸结合型II相代谢产物。根据代谢物,我们对其代谢途径进行了推测。结论:本实验应用UPLC-Triple TOF-MS检测技术,成功地发现和鉴定了二者在大鼠体内的代谢物,为二者在体内的代谢过程和药理作用机制的阐明奠定了基础。同时根据二者代谢物的特点为其它α-亚甲基-γ-内酯类倍半萜的体内代谢物的检测提供了模板依据。