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水稻(Oryza sativa L.)不仅是重要的粮食作物,而且还是一种有广泛理论和应用价值的模式生物。水稻基因组测序完成后,有大量预测的基因需要确定其功能。从基因序列到功能的反向遗传学方法是解析预测基因功能的有效手段。
在植物中,MYB转录因子是一类重要的调控因子,其功能几乎涉及了植物生长发育和代谢调控的各个方面。虽然MYB类蛋白是水稻最大的转录因子家族,但目前对水稻MYB类转录因子的功能还了解甚少。
本研究采用过量表达和抑制基因表达的反向遗传学方法对若干缺乏合适突变体的MYB基因进行功能研究。这里主要报告对其中两个基因——OsMYB60L1(Os12g0125000)和OsDIRP1(OsO1g0193900)的研究结果。OsMYB60L1是拟南芥AtMYB60的同源基因,编码一个典型的R2R3-MYB转录因子。OsMYB60L1基因的表达具有一定的组织特异性,在水稻叶片中的表达量相对较高,其表达可能还受细胞分裂素的负调控。OsMYB60L1是一个细胞核定位蛋白。在酵母体系中,OsMYB60L1蛋白具有转录激活活性。用反向遗传学手段对其功能进行了分析,结果表明它可能与水稻叶片的发育和(或)生理功能相关。过量表达该基因可造成转基因水稻叶片发生卷曲;对过表达植株的叶片组织解剖学的分析表明,叶片卷曲可能是由于泡状细胞的形态和排列方式发生变化造成的。另外,OsMYB60L1的转录本与其反义链编码的Rev OsMYB60L1(Os12g0124900)基因的转录本可形成一个典型的正义-反义转录本对,Rev OsMYB60L1可能编码一个mRNA-like non-coding RNA。Rev OsMYB60L1的RNAi和OsMYB60L1的过量表达表型一致,其转基因水稻都表现为叶片卷曲,推测Rev OsMYB60L1的功能可能主要是对OsMYB60L1进行转录后调控。
DIRP((D)omain(i)n(R)b-related(P)athway)蛋白是一个在真核生物中广泛存在的蛋白质家族,其共同特点是都含有保守的DIRP结构域。高等植物的DIRP蛋白结构比较特殊,它们的N-端还有一个MYB结构域,这类蛋白也被看成一类特殊的MYB转录因子。水稻基因组中有两个DIRP基因——OsDIRP1和OsDIRP2。OsDIRP1在水稻基因组中为单拷贝,编码一个由833个氨基酸残基组成的蛋白质。OsDIRP1是一个细胞核定位蛋白。OsDIRP1在细胞分裂相对活跃的组织中表达较强,尤其是在节和叶环等部位特异表达。用RNAi手段下调OsDIRP1可造成株型发育异常,转基因水稻出现高位分蘖和矮化等表型,暗示该基因在水稻株型的正常发育中有重要的功能。