【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨brcaa1基因敲除后对胃癌MGC-803细胞的作用机制。方法:根据brcaa1基因序列设计shRNA,构建brcaa1基因shRNA载体。用FuGene HD将构建的shRNA-brcaa1质粒与
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目的:本研究旨在探讨brcaa1基因敲除后对胃癌MGC-803细胞的作用机制。方法:根据brcaa1基因序列设计shRNA,构建brcaa1基因shRNA载体。用FuGene HD将构建的shRNA-brcaa1质粒与阴性对照质粒shRNA-N转染胃癌MGC-803细胞,24 h后用荧光显微镜观察转染效率,用实时定量PCR检测BRCAA1和GAPDH基因mRNA表达水平;用MTT法检测转染后24 h、48 h与72 h的细胞增殖水平;用Annxin-V PE/7AAD检测转染24 h的细胞凋亡水平;用Western blotting检测转染48 h后的凋亡相关蛋白的表达水平;构建胃癌肿瘤动物模型并进行动物实验。结果: BRCAA1 siRNA表达质粒MGC-803细胞24 h的转染效率为(81.2±2.6) %。转染后48 h MGC-803细胞的BRCAA1 mRNA水平下降了61.4%;MGC-803细胞增殖的抑制率达45.0%;转染siRNA细胞的凋亡率明显高于未转染细胞和对照质粒转染细胞[(14.4±1.6) % VS (5.4±2.0) %,(4.4±2.5) %,P<0.05]。转染siRNA细胞的凋亡相关蛋白Rb与Bax的表达量显著增加(P<0.05),Bcl-2的表达量显著减少(P<0.05);注射BRCAA1 siRNA表达质粒7天后,肿瘤生长速度显著下降(P<0.05)。结论:BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其机制与其促进Rb和Bax蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达有关。同时动物实验表明brcaa1基因可能是一个潜在的针对胃癌的基因治疗靶点。
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