黄芪多糖体外对小鼠髓源性树突状细胞分化与成熟的影响

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树突状细胞(dendriticcell,DC)是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞,可激活初始T细胞,在诱导特异性免疫反应过程中起着重要作用。研究表明不同分化阶段的DC在表型、形态学、功能及迁移能力等方面存在着很大差异。未成熟DC具有很强的吞噬、加工抗原能力,提呈功能较弱,可诱导免疫耐受。成熟DC表达高水平的MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86、ICAM-1等,分泌高水平IL-12,具有较强抗原提呈功能,而吞噬、加工抗原能力减弱。肿瘤、慢性肝炎、自身免疫性及移植排斥反应等疾病的发生、发展与患者免疫功能密切相关,已研究证明这些患者体内DC发生了不同程度的数量和功能变化,因此通过改变DC数量及成熟状态,纠正机体免疫紊乱,进而达到治疗和控制疾病的目的,成为新的研究热点。黄芪多糖(astragaluspolysaccharide,APS)是中药黄芪的有效成份,具有多种免疫调节作用,能恢复受抑的造血功能,改善免疫细胞活性,增强DC疫苗的抗肿瘤作用,但APS是否具有促进DC分化与成熟的作用目前还少见报导。 [目的]探讨APS是否具有诱导小鼠髓源性DC分化和成熟的作用,以阐释APS药理作用的机制。 [方法](1)分离小鼠髓源性DC前体,分APS、APS+IL-4、APS+GM-CSF、GM-CSF+IL-4及空白对照5组,进行诱导培养,其中GM-CSF浓度10mg/L,IL-4浓度1mg/L,各组APS采用25、50、75、100mg/L四个浓度;倒置显微镜观察细胞生长状态,电镜检测细胞形态,流式细胞仪检测CD11c、MHC-Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86表达水平,混合淋巴细胞培养检测DC提呈功能。(2)GM-CSF(10mg/L)+IL-4(1mg/L)诱导小鼠髓源性DC,在培养第六天加入25、50、75、100mg/L不同剂量的黄芪多糖进行诱导,以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)1mg/L为阳性对照,诱导36h后,流式细胞仪检测CD80、CD86、CD11c、MHC-Ⅱ类分子的表达水平。 [结果](1)培养第3d时,GM-CSF+IL-4和GM-CSF+APS组,倒置显微镜下可观察到疏松贴壁的簇状细胞集落;APS、APS+IL-4及空白对照组细胞分散生长无细胞集落形成,且生长状态较差;第5d时,GM-CSF+IL-4和GM-CSF+APS组,簇状集落减少,出现了大量形态不一的悬浮细胞;APS、APS+IL-4及空白对照组仅有少量贴壁细胞生长,大部分细胞已经死亡。第7d时,收获GM-CSF+IL-4和GM-CSF+APS组细胞,电镜下可以看到树突状突起,流式细胞仪检测CD11c+细胞约占78%,CD80+为67%,CD86+为71%,MHC-Ⅱ类分子为48%;APS、APS+IL-4及空白对照组散在少量贴壁细胞,绝大多数细胞已经死亡。(2)GM-CSF+IL-4诱导小鼠髓源性DC,APS刺激36h后,流式细胞检测结果显示:APS100、APS75、APS50组CD80、CD86、CD11c、MHC-Ⅱ类分子表达水平高于空白对照组及APS25(P<0.05),与LPS组类似(P>0.05),空白对照组与APS25无明显差异(P>0.05)。 [结论]APS(上海药物研究所)不能诱导小鼠髓源性DC前体分化为DC,但可能有促进DC成熟的作用。
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