肌苷是一种在体内广泛存在的小分子物质,它对多个系统、多种细胞都存在较好的保护作用。近年来的有关肌苷对中枢神经系统的保护作用的研究提示,肌苷不仅能够调节免疫细胞的作用、促进神经元轴突广泛的生长,还对损伤后的神经细胞的有较好的保护作用,在体外化学性缺氧环境中肌苷可以保护ROC-1细胞、星形胶质细胞和神经元的活性,在体内肌苷治疗脑缺血损伤大鼠能够减少神经细胞的凋亡和死亡、抑制血小板的聚积、磷酸肌醇的降解和钙离子的形成、减轻脑缺血损伤程度,减小脑梗死的体积、抑制谷氨酸的突触后效应、促进大鼠神经功能恢复。尽管如此,但是ROC-1是一种大鼠少突胶质细胞和C6胶质细胞融合而成的杂交瘤细胞,同时具有这两种细胞的属性,无法肯定肌苷对少突胶质细胞缺氧损伤后有保护作用;另外ROC-1是一种不死的瘤细胞,且没有区分不同的分化阶段,无法真正体现少突胶质细胞对病理损伤的敏感性;最后,虽然肌苷治疗脑缺血模型大鼠能够减少神经细胞的凋亡、促进神经功能的恢复,但肌苷对体内缺血缺氧环境下的少突胶质细胞的保护作用仍然不清楚。因此,调查研究肌苷对缺氧环境下少突胶质细胞的保护作用有着极其重要的意义。本研究分为三部分,第一部分调查研究在化学性缺氧环境中肌苷是否对分化后的少突胶质细胞有保护作用;第二部分调查研究肌苷在化学性缺氧环境中是否对具有增殖能力的少突胶质前体细胞有保护作用;第三部分调查研究肌苷治疗脊髓挫伤模型7天后对大鼠运动功能恢复和临近坏死区的少突胶质细胞存活的影响。第一部分实验通过免疫荧光染色等形态学观察,同时结TUNEL染色、MTT实验和ATP检测实验来评估肌苷对不同分化阶段少突胶质细胞在化学性缺氧损伤环境下细胞存活和活性的影响。结果表明:采用相同浓度的鱼藤酮损伤不同分化阶段的少突胶质细胞24 h所造成的损伤不相同。因而,要达到大致相似的损伤程度所使用的鱼藤酮浓度也就不同,未成熟少突胶质细胞的损伤浓度为5μM鱼藤酮,成熟少突胶质细胞的损伤浓度为20μM鱼藤酮。在未成熟少突胶质细胞和成熟少突胶质细胞大致相似的损伤程度下采用肌苷预处理受损伤的少突胶质细胞,结果肌苷能明显减少未成熟少突胶质细胞的死亡和凋亡,并且肌苷呈剂量依赖性提高受损的未成熟少突胶质细胞的活性,但是肌苷只能减少成熟少突胶质细胞的死亡,不能减少成熟少突胶质细胞的凋亡,并且10 mM肌苷能提高受损成熟少突胶质细胞的活性。肌苷促进分化后少突胶质细胞的存活、提高分化后少突胶质细胞的活性和肌苷减少鱼藤酮介导细胞内产生的过亚硝酸盐、提供ATP有一定的相关性。对未成熟和成熟少突胶质细胞的保护效果的差异可能与这两个阶段少突胶质细胞上的腺苷受体的表达差异有关。第二部分实验通过免疫荧光染色等形态学观察,同时结合MTT实验来评估肌苷对少突胶质前体细胞在化学性缺氧损伤环境下细胞存活和活性的影响。结果表明:20μM鱼藤酮能够明显地诱导OPCs的死亡、细胞活性和细胞总数下降,阻止NG2抗原的表达,但并没有诱导OPCs的凋亡,10 mM肌苷预处理鱼藤酮损伤的OPCs并不能够减少鱼藤酮所诱导的OPCs的死亡和活性下降,却能提高受损细胞上NG2抗原的表达。除此之外,值得注意的是10 mM肌苷能够显著降低正常培养的OPCs(也就是空白对照组的OPCs)的活性。第三部分实验通过行为学和免疫组织化学来观察大鼠腹腔注射肌苷对脊髓挫伤模型大鼠运动功能恢复和临近坏死区的少突胶质细胞存活数目的影响。结果表明:给脊髓挫伤大鼠模型腹腔注射肌苷(75mg/kg,每8 h一次)治疗对大鼠的运动功能和临近坏死区的少突胶质细胞存活数目并没有改善作用。在体外实验中我们确实观察到肌苷能明显促进化学性缺氧损伤的未成熟和成熟少突胶质细胞的存活和活性的提高。对分化后的少突胶质细胞的保护机制和肌苷所提供的ATP、肌苷清除过亚硝酸盐具有一定的相关性。对化学性缺氧损伤的少突胶质前体细胞的存活和活性的提高没有改善作用。同时在用肌苷治疗脊髓挫伤大鼠模型时也没有观察到损伤区周边的少突胶质细胞的数目增加和大鼠运动功能恢复,可能的原因是:脊髓损伤后的给药剂量、给药途径、给药时间和观察时间长度可能对肌苷治疗脊髓损伤大鼠的疗效的存在着不同的影响。