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丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)是丙型肝炎的致病体，全世界约有1.7亿丙肝感染者。HCV感染可有多种不同的临床表现，而大部分感染者发展成慢性肝炎，从而更易演变为肝硬化和肝细胞癌。由于丙型肝炎的严重危害，近年来，丙型肝炎病毒的研究特别是病毒分子生物学研究进展十分迅猛。1999年Lohmann等在Science上首先报道了选择性双顺反子亚基因组HCV RNA复制子系统，复制子在人肝癌细胞系Huh7中能高水平自主复制，这被公认为是HCV RNA体外复制模型研究获得突破性进展的里程碑。复制子系统的建立，对HCV致病机制、治疗药物筛选及疫苗方面的研究具有重要的意义。
本工作意在构建一种能直观快速反应细胞内HCV RNA数量的重组HCV 1b复制子，而无需利用G418筛选后再通过RT-PCR来检测细胞内的HCV RNA，对于定性评价某种化合物对于HCV的抗性有重要意义。该重组载体构建的基本思路为：利用AscⅠ和PmeⅠ酶切位点将HCV 1b亚基因组复制子内的G418抗性基因neo片段切下，同时利用PCR方法获得术端加入了上述两种酶切位点的EGFP片段，通过体外连接得到了一种不含G418抗性基因，而含有EGFP报告基因的重组HCV1b亚基因组克隆pEGFP-1b；该cDNA克隆经过体外转录，得到了重组的HCV 1b亚基因组RNA，应用脂质体转染技术瞬时转染Huh7细胞后，却并未如预期结果检测到细胞荧光。然而工作中在相同实验条件下利用pEGFP-N1质粒瞬时转染Ituh7细胞，能观察到明显的细胞荧光。