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突触后密集区蛋白95(postsynaptic density 95；PSD-95)是在兴奋性突触的突触后密集区发现的一种高度表达的蛋白质，在突触形成早期PSD-95即定位、聚集于突触后膜，与多种蛋白相互作用，参与调节突触信号传递及突触可塑性。研究表明，脑缺血/再灌注PSD-95介导了Src家族酪氨酸蛋白激酶(Src family protein tyrosine kinase；SrcPTKs)对N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate；NMDA)受体亚基NR2A的酪氨酸磷酸化，增强NMDA受体通道活性，抑制PSD-95蛋白表达有神经保护作用。为了阐明脑缺血/再灌注PSD-95自身功能调节机制，利用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型，采用免疫印迹、免疫沉淀的方法观察了脑缺血/再灌注大鼠海马组织中PSD-95的酪氨酸磷酸化情况；研究了PTK抑制剂Genistein(Gen)、特异性SrcPTKs抑制剂PP2对上述脑缺血/再灌注诱导的PSD-95酪氨酸磷酸化水平的影响；进行体外共转染活性型Src(aSrc)/非活性型Src(iSrc)与PSD-95及其突变型，观察PSD-95及其突变型的蛋白表达及酪氨酸磷酸化情况。
1.脑缺血/再灌注PSD-95的酪氨酸磷酸化调节
SD大鼠全脑缺血15min或缺血后再灌注6h(I/R6h)，以抗PSD-95抗体免疫沉淀，抗pY抗体免疫印迹，或抗pY抗体免疫沉淀，抗PSD-95抗体免疫印迹，PSD-95的酪氨酸磷酸化水平均显著升高，分别为假手术组的5.4、1.7倍。上述情况下，PSD-95的蛋白表达量无明显改变。结果表明：脑缺血促进PSD-95酪氨酸磷酸化水平的升高。
2．Gen、PP2抑制脑缺血／再灌注诱导的PSD-95酪氨酸磷酸化水平的升高，并影响Src与PSD-95的结合
缺血前20min腹腔注射Gen，或缺血前30min脑室注射PP2，选择缺血1 5min，I／R6h两个时间点，检测大鼠海马组织中PSD-95的酪氨酸磷酸化情况。结果显示，Gen和PP2均对脑缺血／再灌注PSD-95酪氨酸磷酸化水平的升高有明显的抑制作用，并影响Src与PSD-95的结合。上述情况下，PSD-95及Src的蛋白表达量无明显变化。结果表明：脑缺血／再灌注诱导的PSD-95酪氨酸磷酸化水平的升高由SrcPTKs介导。
3．aSrc／iSrc对PSD．95的磷酸化作用
将aSrc／iSrc与PSD-95的表达载体共转染真核表达细胞cos-7，24小时后收集细胞，检测PSD-95的蛋白表达及酪氨酸磷酸化情况。结果显示，与对照组相比，与aSrc共表达的PSD-95发生了明显酪氨酸磷酸化。结果表明：Src介导了PSD-95酪氨酸磷酸化。
4．aSrc对PSD-95突变体的磷酸化作用
将PSD-95突变体与myc的融合蛋白myc．ASG(缺失PSD-95的GK、SH3结构域)、myc-AG(缺失PSD-95的GK结构域)分别与aSrc在COS-7细胞内共表达；24小时后收集细胞，以免疫沉淀检测酪氨酸磷酸化情况。结果表明：myc-AG发生了明显酪氨酸磷酸化，myc-ASG未见明显酪氨酸磷酸化。结果提示：PSD-95的酪氨酸磷酸化位点在SH3结构域。