肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF）是一种多效细胞因子,通过与特异性肿瘤坏死因子受体（Tumor necrosis factor receptor,TNFR）结合后参与机体免疫应答反应。为了逃避宿主的免疫监视和清除,有些病毒会编码类似于宿主的细胞因子或细胞因子受体。目前已证实痘病毒、疱疹病毒等能编码肿瘤坏死因子受体同系物,称为病毒肿瘤坏死因子受体（Viral tumor necrosis factor receptor,vTNFR）。鲤疱疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3）全基因组测序发现ORF4和ORF12能够编码vTNFR,但对于vTNFR在病毒免疫逃逸中的作用仍有待研究。本论文对CyHV-3 vTNFRs基因进行了克隆,分别命名为vTNFR4和vTNFR12,统称为vTNFRs。通过原核表达系统获得重组vTNFRs（Recombinant viral tumor necrosis factor receptor,rvTNFR）蛋白,研究了蛋白对宿主细胞免疫相关因子表达调节及细胞凋亡的影响,并制备了多克隆抗体。（1）CyHV-3 vTNFRs基因克隆及表达通过PCR扩增CyHV-3 ORF4和ORF12基因序列,将目的序列克隆到原核表达载体p ET-32a（+）,转化到Transetta（DE3）感受态细胞后,IPTG诱导表达获得大小约为53 k Da的重组ORF4蛋白（命名为rvTNFR4）和32 k Da的重组ORF12蛋白（命名为rvTNFR12）,统称为rvTNFRs。按照Bio-Rad中高压层析系统的操作进行纯化,获得纯化的rvTNFRs蛋白。（2）CyHV-3 vTNFRs蛋白的活性研究为研究CyHV-3 vTNFRs对免疫相关因子表达水平的影响,用rvTNFRs蛋白刺激鲤鱼头肾巨噬细胞,荧光定量PCR进行检测。结果显示,高浓度（20μg/m L）的CyHV-3rvTNFRs可以不同程度地上调免疫相关因子的表达,如白介素6（Interleukin-6,IL-6）、白介素8（Interleukin-8,IL-8）、白介素12（Interleukin-12,IL-12）、白介素1β（Interleukin-1beta,IL-1β）、组织相容性复合体Ⅰ（Major histocompatibility complex I,MHC I）和CXC趋化因子a（CXC chemokine a,CXCa）,在刺激后12 h或24 h效果最显著。为探究CyHV-3 vTNFRs对宿主细胞凋亡的影响,用rvTNFRs蛋白刺激EPC,结合光镜观察、Hoechst33342染色、流式细胞术检测细胞凋亡,结果证实rvTNFRs能促使EPC发生凋亡,且rvTNFR4引起的凋亡率高于rvTNFR12。（3）CyHV-3 rvTNFRs多克隆抗体的制备将重组蛋白rvTNFRs对小鼠背部皮下多点注射,三次免疫后采集小鼠血清,获得鼠源多克隆抗体。经Western Blot检测证实多抗血清的特异性,琼脂扩散试验测定了多抗血清的效价,rvTNFR4鼠源多克隆抗血清效价为1:2,rvTNFR12鼠源多克隆抗血清效价为1:4。本实验成功克隆表达了CyHV-3 ORF4和ORF12基因。获得纯化的rvTNFRs蛋白,证实CyHV-3 vTNFRs能上调部分免疫相关因子的表达以及诱导EPC细胞的凋亡,为研究CyHV-3 vTNFRs在病毒入侵宿主过程中的作用机制提供了理论和实验依据。此外,制备的鼠源vTNFRs多克隆抗体也为ELISA、间接免疫荧光等免疫学检测方法的建立提供了基础。