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近年来,海南、广东和广西等我国南方地区养殖罗非鱼(Tilapia)爆发了十分严重的链球菌病,其病原主要为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,SA),发病率达20%-50%,死亡率达50%以上,成为当前制约罗非鱼养殖业可持续发展的最主要因素之一。由于链球菌可利用宿主巨噬细胞逃避抗生素类药物对其杀害作用,利用抗生素防治链球菌病的效果不是很理想。中草药是纯天然的药物、具有多功能多靶点作用、不易引起病菌耐药性和无药物残留等优点,在水产养殖动物病害防控的应用越来越广泛。本文从海南罗非鱼养殖场选择具有典型链球菌病患病症状的罗非鱼进行病原分离鉴定,并利用所分离的病原快速筛选具有显著抗病原效果的中草药,并优化其活性成分的提取条件,为罗非鱼链球菌病的安全高效防治探索新的途径。从海南琼海和文昌罗非鱼养殖场采集具有典型链球菌病患病症状的罗非鱼,分离获得了2株优势菌株：QH-726、WC-806。通过腹腔注射感染试验结果表明,该2株菌株对健康罗非鱼均有很强的致病性,感染患病罗非鱼的症状与自然患病罗非鱼相似。采用常规形态、生理生化鉴定以及16S rRNA基因序列系统发育进化分析,确定该2株菌均为SA。根据已有的文献资料,选择具有较好抗菌效果的中草药进行抗SA中草药筛选,其中,采用超声波法和沸水浴法分别制备了75种中草药粗提液；采用50℃水浴和常温浸泡法分别制备了102种中草药粗提液,之后用微孔板法分别对各种中草药粗提液的抗SA活性进行初筛,再用琼脂扩散法对初筛抑菌率达5%以上的中草药进行复筛,并以二倍稀释法测定复筛出的中草药的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC)。结果表明,通过初筛分别从不同组别中均获得了一定数量的具有良好抗SA效果的中草药,包括超声波法获得了10种、沸水浴法获得了8种、50℃水浴法获得了14种、常温浸泡法获得了l0种30种；在初筛的基础上采用琼脂扩散法进一步复筛的结果表明,超声波法制备的中草药粗提液中有8种具抗SA活性、沸水浴法有8种、50℃水浴有14种和常温浸润法有21种,初筛准确率为82.3%。以腹腔注射感染法建立罗非鱼链球菌病感染患病模型,对感染SA之后出现患病症状之前的罗非鱼拌料投喂含10%中草药(生药量)的饲料,检测所筛选中草药对罗非鱼链球菌病的防治效果,结果表明,超声波法中草药提取液有1种对治疗罗非鱼链球菌病效果显著、50℃热水浴法中草药提取液有4种、常温浸泡法中草药提取液有3种,其中,8种对感染SA的罗非鱼有保护效果,保护率分别为100%、77.8%、55.6%、33.3%、75.0%、62.5%、25.0%和12.5%。测定了保护率75%以上的3种中草药对治疗罗非鱼链球菌病的半数有效剂量(ED50),分别为4.934%、4.483%和3.908%,这3中中草药对防治罗非鱼链球菌病的最小有效剂量分别为生药量的0.052%、0.013%和0.001%。中草药中活性成分复杂且含量较低,分离纯化困难,为了在提取时提高活性成分得率,本文首先采用单因素法优化了所筛选的中草药TCH15中抗SA活性成分的提取条件,然后采用中心组合试验设计结合响应面分析法进一步优化,结果表明从TCH15中获得抗SA活性成分的最佳提取条件为：液料比37.80:1.00(mL:g)、温度86.7℃、浸润时间104min、提取时间为182min,在最佳提取条件下从TCH15中提取抗SA活性成分得率的预测极值为25.9%,在最优条件下,进行4平次行验证,抗SA活性成分提取得率为(25.87±0.03),为优化前的2.59倍。总之,本文建立了快速筛选抗SA菌中草药的方法,并考察了所筛选中草药对人工感染SA的罗非鱼的治疗效果,优化了中草药中抗SA的提取条件,研究结果对获得安全高效的罗非鱼链球菌病防治种草药物以及提高罗非鱼养殖成活率及养殖产品质量有良好作用。