一株产卡拉胶酶南极菌Alteromonas sp.R11-5的筛选、优化培养及酶学性质的研究

来源 :青岛大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cool_bl
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本论文从85株南极细菌中筛选获得12株具有产卡拉胶酶活性的菌株,并对高活性菌株R11-5进行种属鉴定,优化其发酵条件;通过对该菌全基因组测序分析,克隆获得卡拉胶酶基因Car1853,并实现其异源高效表达;纯化重组卡拉胶酶,系统研究其酶学性质,分析该酶的降解特性,阐明其降解产物及其类型,以期为卡拉胶酶和卡拉寡糖的工业化生产提供理论和技术支持。本实验首先对筛选出的产高活性卡拉胶酶菌株R11-5进行种属鉴定,根据形态学和16S rDNA法的种属鉴定结果表明该南极菌属于交替单胞菌属(Alteromonas)。通过响应面分析法对菌株优化培养单因素实验的结果最佳培养条件为温度15.7℃、p H7.0、酵母粉0.6%、牛肉膏1.17%、卡拉胶1.05‰、CaCl25.78 mmol/L,接种量为2%,在此培养条件下,能够得到理论上最大酶活值为56.972 U·mL-1,经过优化培养后酶活提高了1.7倍。通过对该菌全基因组测序分析,克隆获得了卡拉胶酶基因Car1853,采用基因工程手段构建重组质粒pET30a-Car1853,,并成功转化大肠杆菌BL-21。采用Ni柱技术纯化获得单一条带的重组卡拉胶酶,SDS-PAGE显示其分子量为42 kDa;酶学性质研究表明,该酶最佳反应温度为55℃,最佳pH为7.0,且多种金属离子对其活性具有抑制作用。薄层层析法初步表明该卡拉胶酶裂解卡拉胶的终产物主要是卡拉胶二糖。
其他文献
<正>上市公司财务治管理是指基于财务资本结构等机制安排,本质是对公司收益权、投资权、筹资权、财务决策权在不同投资主体间的配置,以形成有效的财务激励与约束机制。笔者以
彩礼是一种在我国各地盛行的重要婚娶仪式。就其本质而言,彩礼制度只是一种民俗习惯,不受法律的强制规范。在现实生活中,彩礼或嫁妆的数额相对较大,因彩礼纠纷而引起的案件在
对东北林蛙(Rana dybowskii Guenther)和黑龙江林蛙(Rana amurensis Boulenger) 2个野生种的林蛙油进行蛋白质翻译后修饰的差异性分析,并与市售林蛙油进行对比。运用Western
通过对2014年美国颁布的WELLv1.0建筑标准和2006年我国实施的GB5749—2006《生活饮用水卫生标准》在污染物种类、浓度限值、实时监测3个方面进行比较,发现WELL建筑标准中的要
目的:观察绿茶多酚对高脂诱导非酒精性脂肪肝的作用,并探索可能机制.方法:采用高脂饲料饲养大鼠,并通过饮水进行低中高三个浓度的绿茶多酚干预,观察大鼠的体脂、糖脂代谢改变
为了定量分析塔里木河中上游土地利用变化对径流的影响程度,基于塔里木河流域1980-2015年土地利用数据及相关水文系列资料,利用MIKE SHE分布式水文模型客观模拟评价了流域中
通过对郑州市的降水进行系统的演变特征分析,预测区域年降水量与日暴雨,有利于揭示郑州地区降水的时间变化规律和演变特征,指导防洪减灾,提升水资源的规划、管理水平,促进区
目的回顾骶骨脊索瘤外科治疗后长期随访的结果 ,分析评估影响外科治疗效果的临床因素。方法 1978年10月至2000年10月,我院共收治68例骶骨脊索瘤,男性60例,女性8例,年龄25~74岁
三波长彩色数字全息方法可以实现对物体表面三维变形场的实时测量,但由于散斑退相关噪声的存在,使得该方法的相位处理变得十分困难,降低了测量结果的精度。本文提出了结合降
目的研究利用B超测量调强放射治疗中宫颈癌患者膀胱体积与锥形束CT(CBCT)勾画出体积的相关性.方法入组2018年5-6月进行调强放射治疗的宫颈癌患者25例.患者进行放射治疗前利用常