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植原体无细胞壁,由3层膜包被,呈现多态型,目前仍不能进行离体人工培养。菌体细胞膜直接与寄主植物和虫媒介体细胞接触,推测植原体膜蛋白可能参与了寄主-病原菌的互作,因此研究植原体膜蛋白对于了解植原体的进化、致病性及其与寄主的相互作用具有重要意义。免疫膜蛋白是植原体膜蛋白中重要的蛋白之一,从发病的植物中已经获得十余种编码免疫膜蛋白的基因,关于植原体基因的研究为利用基因工程的手段研究植原体奠定了基础。目前,利用分子生物学及免疫学手段已制备出免疫膜蛋白的抗血清和基因芯片等,这些检测手段的建立为植原体的检测提供了更好的途径。本研究利用分子生物学手段构建原核表达载体,利用诱导剂IPTG诱导原核表达体系对植原体免疫主导膜蛋白A (IdpA)进行表达,同时重组蛋白IdpA引入6×His标签,可以利用Ni-NTA His-Bind树脂进行亲和层析纯化,再以纯化的目的蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备植原体膜蛋白IdpA的单克隆抗体,从而为制备快捷、方便、高通量的蛋白芯片奠定研究基础。以重组克隆质粒pMD18-T-IdpA为模板,经PCR扩增IdpA基因片段,PCR产物在750-1000bp之间有与目的基因IdpA (864bp)片段大小一致的明显条带,经酶切和连接将IdpA基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),用重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3), PCR和双酶切鉴定表明：IdpA基因成功导入原核表达载体；对重组菌进行平板培养,筛选阳性克隆,测定重组菌生长曲线,在对数生长期OD600值1.0时加入IPTG,诱导重组菌表达目的蛋白,利用SDS-PAGE蛋白电泳初步鉴定IdpA蛋白表达；由于融合蛋白具有6×His标签,用带HRP标记的Anti-His标签抗体,通过Western blotting检测验证带6×His标签融合蛋白的表达,成功筛选稳定表达目的蛋白的重组菌；经可溶性分析可知,IdpA蛋白以包涵体形式表达,利用变性纯化再透析复性的方式获得目的蛋白,经^Ni-NTA His-Bind树脂亲和层析纯化获得了纯度大于90%的高纯度目的蛋白,再进行透析复性和超滤管浓缩,获得了浓度约为0.8mg/ml的目的蛋白；用纯化的IdpA蛋白免疫BALB/c小鼠,免疫三次后对小鼠断尾取血,ELISA检测抗血清的效价高于1：320000,Western blotting检测抗血清具有特异性,融合前3天静脉加强免疫,取小鼠脾脏细胞,与对数生长期SP2/0细胞在浓度为50%的PEG4000作用下融合,应用ELISA检测细胞上清效价,筛选阳性克隆,经过两轮筛选,获得3株稳定分泌[dpA蛋白抗体的单克隆细胞株。