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目的：观察重组人肠三叶因子(recombinant human intestinal trefoil factor, rhITF)对肠上皮细胞移行能力的影响并探讨其作用机制。方法：1.实验用药：采用本实验室重组表达的人肠三叶因子(rhITF)作为细胞刺激药物，该重组蛋白纯度达到98%以上，符合临床前药物研究标准。2.细胞模型：以传代培养的人结肠癌Caco-2细胞株为研究模型，购置于中科院细胞所，鉴定正确后进行传代培养，再将传至第5-10代的细胞用于实验。3.实验分组：根据实验目的不同，本实验采用多个分组模式，涉及的实验组包括：(1)阴性对照组和不同浓度的rhITF组；(2)正常对照组、用药3h组、6h组、12h组和24h组；(3)正常对照组、rhITF组和rhITF+抑制剂组；(4)阴性对照组、rhITF组和rhITF+抑制剂组。4.培养条件：(1)阴性对照组：DMEM培养液；rhITF组：撤掉血清后分别给予10μg/ml rhITF、25μg/ml rhITF和50μg/ml rhITF；(2)正常对照组：DMEM培养液+10%小牛血清；不同时相点组：固定rhITF浓度为50μg/ml，分为3h、6h、12h和24h组；(3)正常对照组：同(2)；rhITF组：50μg/ml rhITF；rhITF+抑制剂组：50μg/ml rhITF+50μg/ml染料木黄酮；(4)阴性对照组：DMEM培养液；撤掉血清后分别加入50μg/ml rhITF和50μg/ml rhITF+50μg/ml染料木黄酮。5.检测指标：(1)细胞移行：采用Transwell法，观察肠上皮细胞移行能力的变化。(2)黏附分子细胞定位和荧光表达：采用免疫荧光法检测黏附分子β-Catenin和E-Cadherin在肠上皮细胞的定位和荧光表达情况。(3)黏附分子含量：采用Western Blot法观察黏附蛋白β-Catenin和E-Cadherin的蛋白表达变化。(4)黏附分子磷酸化水平检测：采用Western Blot法检测磷酸化β-Catenin的蛋白表达变化。结果1. rhITF促细胞移行能力随其浓度的增加而增强。50μg/ml rhITF组细胞数明显高于阴性对照组、10μg/ml rhITF组和25μg/ml rhITF组，差异有统计学意义(P＜0.01)；25μg/ml rhITF组与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。而10μg/ml rhITF组与阴性对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。2.β-Catenin和E-Cadherin荧光表达和蛋白表达均受到rhITF抑制，与正常对照组、3h组、6h组和24h组比较，12h组荧光表达和蛋白表达明显减弱(P＜0.05)。3.在rhITF的刺激下，与正常对照组、3h组、6h组和24h组比较，12h组磷酸化β-Catenin的蛋白表达明显增强(P＜0.05)。4.在rhITF和抑制剂（染料木黄酮）刺激下，rhITF组磷酸化β-Catenin的蛋白表达强于正常对照组和rhITF+抑制剂组(P<0.05)。5.抑制β-Catenin磷酸化后能明显降低rhITF促进细胞移行的能力。rhITF组细胞数显著高于阴性对照组和rhITF+抑制剂组(P＜0.01)，而rhITF+抑制剂组与阴性对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论1．ITF具有促进肠上皮细胞移行的能力。2．ITF通过抑制细胞间黏附分子β-Catenin与E-Cadherin的表达，降低细胞间黏附力，促进细胞移行。3．ITF促进细胞移行的核心机制是使β-Catenin磷酸化，削弱β-Catenin和E-Cadherin交联，干扰细胞间黏附，从而促进细胞移行。