目的：多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)属中枢神经系统(Central nervous system，CNS)自身免疫性疾病，在世界范围内的发病率呈逐年上升趋势，为青壮年致残的主要神经系统疾患之一，已对人类的健康和劳动力资源构成了严重的威胁。目前临床上尚无针对本病的理想疗法。实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)是T细胞介导的CNS脱髓鞘疾病，是研究人类脱髓鞘疾病MS的理想动物模型，二者在致敏抗原、临床表现、组织病理改变和发病机理等方面均类似。通过动物模型口服抗原诱导免疫耐受是目前治疗EAE乃至MS的研究热点，尽管其机制尚不十分明确，但已受到国内外学者越来越多的关注。本研究在建立大鼠EAE模型基础上，以所提取的髓鞘素做为自身口服抗原，用于诱导免疫耐受。并从分子水平上分析口服组和EAE对照组在病程不同阶段(发病早期、高峰期及恢复期)对外周免疫器官中细胞因子mRNA的表达特征，研究细胞因子与EAE发病及口服耐受的关系；同时在EAE病程不同阶段检测外周免疫器官及CNS内细胞凋亡的变化情况，进而探讨免疫耐受的机制，为EAE、MS的防治提供依据。 方法：本研究共分三部分。第一部分为髓鞘素的提取与鉴定，采用不连续梯度离心的方法从牛脊髓白质中提取 中文摘要髓鞘素，通过SDSPAGE分子量蛋白电泳检测其主要成分，并通过致敏豚鼠的方法检测其抗原活性，结果显示，髓鞘素的主要成分为大分子量髓鞘碱性蛋白（Myelin basicProtein，MBP人 并具有较强的致 EAE生物学活性；第二部分为EAE动物模型的建立及评价，通过四足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆／完全福氏佐剂（GPSCHCFA人后足路背面真皮内注时百日咳疫苗的方式免疫大鼠，成功地诱导出EAE模型；第三部分为口服髓鞘素对EAE的防治作用及口服耐受扒理研究，以所提取的髓鞘素做为自身抗原，于免疫前7、5、2大、免疫日及免疫后2、5、7大给大鼠口服，剂量为 5 mg／只·次，总量为 3 5 mg／只。免疫日定为第 0大。观察动物发病情况并分别于免疫后第 9、13、23天取材。取动物外周淋巳结及脾，用反转录－聚合酶链反应（RTPCR）半定量法检测外周淋巴结中细胞因子 mRNA的表达情况，同时应用流式细胞仪吓CM）分析 DNA倍体、进行常规HE染色及原位细胞凋亡检测等方法观察外周免疫器官中细胞凋亡情况：并对＊＊S进厅常规＊E染色、原位细胞凋亡检测，研究CNS中细胞凋亡情况。所得各项结果分别同对照组比较，并进行统计学处理。 结果：1．动物发病情况 对照组大鼠最早于免疫后第 9天开始发病，平均发病时间为免疫后第 10刁士 1石天，口服组发病时间较对照组推迟，平均发病时间为兔疫后第11．8士2．4天。口服组症状级别为 2．0士 l．76级，对照组 3．4土1．引级，k0刀5：口服组发病率为刀％，对照组90％，P＞0刀5；病理学检查，口服组＊＊S中单个核细胞浸润的数目和范围较对照组明显减少。 中文摘要 2．RTPCR半定量分析 口服组与对照组均表达炎性 细胞因子肿瘤坏死因子－a（Tmow necrosls factor－a， TNF－a）TnRNA；同对照组相 ＊，口服组 TNFa TnxvA 的表达明显减少；两组均表达抗炎性细胞因子转化生长因 子－p（Transforming gTowth factor－D，TGF－p）mRNA， 同对照组相比，口服组TGF－p nutvA的表达增加。各组 内部，TNFQ TmtNA的表达随症状的加重而增加，TGF pmRNA的表达随症状的加重而下降。 3．流式细胞仪检测结果 口服组与对照组脾和淋巴 结中细胞凋亡率均较低，各组之间及组内无显著性差异。 4．原位细胞凋亡检测结果 门）脾和淋巴结中细胞 凋亡情况：口服组与对照组脾和淋巴结中TUNEL阳性细 胞数量均较少，偶可见阳性细胞。各组之间及组内无显著 性差异。u）脊髓中细胞凋亡情况：正常脊髓中无TUNEL 阳性细胞。EAE对照组动物脊髓中的凋亡现象具有明显 的时程特异性。在EAE早期阶段（免疫后第9大）脊髓 实质内出现大量的TUNEL阳性细胞，并随着病情的进展 而逐渐增多，至疾病高峰期（免疫后第13天）时达到最 高水平，在恢复期（免疫后第23天）数量逐渐减少。日 服组动物的凋亡现象亦具有同样的时程特异性，但各期 TUNEL阳性细胞较EAE对照组减少。各组TmEL阳性 细胞均主要分布于脊髓实质，而血管周围区较少。对同一 蜡块相邻的切片分别行TUNEL染色与HE染色，并进行 对照，从形态学上推断，TUNEL阳性细胞主要为淋巴细 胞、小胶质和巨噬细胞，而星形细胞和神经元则无凋亡现 象。 3 中文摘要