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通过EcoliO157灭活方法的研究，制备菌体抗原。建立鸡免疫程序，获得特异鸡卵黄抗体IgY。进一步研究IgY的酶(HRP)标记方法，同时对IgY和IgY-HRP进行定性定量检测。并以IgY代替哺乳动物抗血清IgG作为免疫检测试剂，建立了夹心ELISA快速检测方法。
首先，本实验研究了E.coliO157菌体抗原的制备及免疫程序的建立，通过免疫过程跟踪检测获取高免卵黄，分离制备特异性IgY。以煮沸15min灭活后的E.coliO157为免疫原，分4次免疫产蛋鸡。109～1010CFU/mlE.coliO157加等量CFA首免，以后每隔10天加强免疫，获取高免卵黄。通过建立和优化间接ELISA检测方法，确定优化条件为：水稀释法预处理卵黄；108～109CFU/mlEcoliO157在4C下包被19h；1:320稀释酶标二抗。该法检测四次免疫后卵黄抗体效价达到1:105以上。同时与AGP方法比较，间接ELISA敏感性好，更适于分离纯化过程的检测。采用水稀释法去脂、膜过滤、盐析粗分离，DEAE-SephadexA-50离子交换层析纯化，得到电泳单点纯IgY，且仍保持效价在1:104以上。
然后，选用HRP以不同方法标记E.coliO157特异IgY纯，通过产物的检测，确定标记方法，分离纯化酶标记物IgY-HRP。NaIO4法标记条件优化：确定反应物IgY和HRP质量比为1:1，反应3h后加入NaBH4还原产物，透析过夜。与戊二醛标记法比较，选择酶标记率为73.6％、反应物利用率高、工作浓度低的NaIO4法标记产物IgY-HRP作为免疫检测试剂。采用50％饱和硫酸铵一次盐析法粗提，SephadexG-75凝胶过滤纯化IgY-HRP。用0.01MpH7.2PBS缓冲液以1ml/3min的速度平衡洗脱，产物经SDS-PAGE显示基本为单点纯；PAGE后加底物显色，证明已获得纯度好、酶活性高的IgY-HRP。
最后，应用前面制备的E.coliO157特异IgY纯和IgY-HRP，建立夹心ELISA检测方法。夹心ELISA检测条件的优化：确定IgY包被浓度为10ug/ml；IgY-HRP工作浓度为1:200(/mg)。并且初步建立了夹心ELISA检测流程。经交叉试验、敏感性试验、重复性试验证明本实验建立的夹心ELISA最低检出量为105CFU/ml，且特异性高，重复性好。
选取E.coliO157为抗原对鸡进行免疫，制备出夹心ELISA检测中的IgY捕获抗体和IgY-HRP检测抗体。本研究不仅建立了两种抗体的分离纯化方法和检测方法，同时也初步建立了EcoliO157感染的快速免疫检测方法。为IgY的广泛应用和食品安全性的检测及食源性疾病的诊断及预防提供了新的途径。