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目的:研究脑创伤后抗凋亡因子Survivin的表达变化及其与内源性神经再生的相关性,通过本研究,初步探讨Survivin蛋白在促进创伤后内源性神经再生中的作用及相关机制,寻求通过扩大内源性神经再生以促进神经功能的修复的方法,为脑创伤的临床治疗提供新思路。方法:选取146只成年C57BL/6小鼠,随机分为假手术组和创伤组(TBI组),取相应时间点的小鼠鼠脑分别进行PCR、Western Blot和免疫荧光染色。所有小鼠购买后先在实验室饲养1周,假手术组予以除液压打击外的所有操作,TBI组予以压强为(202±2)KPa的单侧海马区液压打击。1、进行PCR检测的小鼠,分别在创伤后12小时,1、2、5、7和14天(n=6)取出打击侧的海马行PCR分析,检测创伤后Survivin的mRNA表达变化,假手术组在手术后第3天(n=6)取同侧海马行PCR分析;2、进行Western Blot检测的小鼠,创伤组和假手术组均在创伤(或手术)后的12小时,1、2、5、7和14天(n=6)取出同侧的海马行Western Blot分析,检测创伤后Survivin蛋白的表达变化;3、创伤后的第3天,Survivin蛋白明显增高并稳定表达,因此取创伤后第3天的鼠脑进行免疫荧光染色,对于预行BrdU染色的小鼠在取脑前连续三天(2次/天)进行腹腔注射BrdU(做DCX、NeuN和GFAP染色的小鼠无需特殊处理),将所有小鼠分为TBI组(n=4)和假手术组(n=4),分别做Survivin/BrdU、Survivin/DCX、Survivin/GFAP和Survivin/NeuN的双重染色,在荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察并记录阳性细胞个数。结果:1、实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组相比,TBI组小鼠Survivin的mRNA表达明显增高且呈时间依赖性的变化趋势,在创伤后12小时表达开始增高,1天时到达高峰(P<0.01),14天时回降至正常水平。2、Western Blot结果显示,TBI组小鼠的Survivin蛋白表达明显增高且呈时间依赖性的变化,变化趋势符合从mRNA到蛋白质的转变,在创伤后1天表达开始增高(P<0.05),2天时到达高峰(P<0.01),持续至第7天开始下降,14天时回降至正常水平,而假手术组Survivin蛋白表达量低且无明显变化。3、免疫荧光染色的结果显示,与假手术组相比,TBI组小鼠打击侧海马齿状回颗粒细胞下层的Survivin(+)细胞明显增多(P<0.001)。4、Survivin/BrdU双染显示,绝大多数的Survivin(+)细胞呈现BrdU(+)(93.82±3%); Survivin/DCX双染显示,一部分Survivin(+)细胞呈现DCX(+)(61.28±4%); Surviin/GFAP双染显示,极少数Survivin(+)细胞呈现GFAP(+);Survivin/NeuN双染显示,无Survivin(+)细胞呈现NeuN(+).5、免疫荧光染色的结果还显示,与假手术组相比,打击侧海马齿状回颗粒细胞下层的BrdU(+)细胞和DCX(+)细胞均显著增加(P<0.001)。结论:1、创伤后Survivin基因被激活,基因转录与蛋白表达量明显增高,且呈时间依赖性的规律变化。2、增多的Survivin蛋白主要表达在受伤侧的海马齿状回颗粒细胞下层的神经干细胞和未成熟神经元中,以及少数神经胶质细胞中,但是在成熟的神经元中不表达。3、创伤后Survivin蛋白表达的增高与神经干细胞的增殖有很大的相关性,也许Survivin能够促进损伤后早期干细胞的增殖,以利于神经功能的恢复。4、在未成熟神经元中Survivin蛋白表达增高,可能有利于未成熟神经元的存活或促进其向成熟的颗粒细胞分化。