柚子皮中含有大量的黄酮类物质,平均含量在1%-6%之间,主要为二氢黄酮物质,例柚皮甙、柚皮素、橙皮甙等。之前的科学研究证明柚皮素具有较好的降脂,消炎,抗肿瘤等作用。本研究采用网络药理学和3T3-L1细胞试验,旨在探讨柚皮素降脂作用及其机制,以期寻找一种更安全、更有效的调节肥胖作用的天然化合物。在本研究中,首先利用网络药理学分析柚皮素在肥胖调节中的分子机制,为肥胖干预提供新的方向。其次,采用不同浓度的柚皮素（25、50、100μg/m L）预处理3T3-L1前脂肪细胞24 h后,采用MTT法测定细胞活性。然后在六孔板中培育3T3-L1前脂肪细胞,直至融合,用成脂分化培养基（成分:10%的胎牛血清,0.5 mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤,1μmol/L地塞米松,10μg/m L胰岛素）代替生长培养基进行培养48 h。之后使用具有相同含量的胎牛血清和胰岛素构成的脂肪细胞维持培养基进行培养,每两天对脂肪细胞维持培养基进行更换。用柚皮素（25、50、75μg/m L）治疗3T3-L1前脂肪细胞,直到细胞分化结束。分化结束后,测定3T3-L1成熟脂肪细胞的脂肪含量、TG（甘油三脂）和TC（胆固醇）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定细胞内与脂肪代谢相关的m RNA的表达水平,研究柚皮素的降脂机制。最后使用分子对接技术,模拟柚皮素小分子与AMPK蛋白的作用方式并计算结合能量。网络药理学结果显示,KEGG通路富集结果显示柚皮素介导肥胖与AMPK信号通路显著相关。体外实验显示柚皮素预处理能以浓度依赖的方式抑制3T3-L1细胞活力降低,降低细胞内脂肪含量、TG和TC水平,这些结果显示出柚皮素可以有效降低成熟脂肪细胞内的脂肪堆积含量;此外,RT-PCR分析显示,柚皮素能够促进3T3-L1成熟细胞内的AMPK和CPT-1 m RNA的表达,进而明显抑制ACC、FAS、SREBP-1C和HMGCR m RNA的表达。最后,通过分子对接结果分析显示,在氢键、范德华力等的作用下,柚皮素与AMPK蛋白可以有效结合,并发挥降脂作用。综上所述,柚皮素可能通过激活AMPK信号通路,降低3T3-L1成熟脂肪细胞的脂肪含量和调节脂肪相关基因的表达,来减缓肥胖。