论文部分内容阅读
Dmrt基因家族是新发现的一个基因家族,该家族成员所编码的蛋白质都包含一个具有DNA结合能力的保守基序,即DM结构域,以锌指结构与特异DNA序列相结合,通过调节目的基因转录发挥作用,主要参与性别决定与分化、早期胚胎发育及器官形成。
Sox基因是一类进化中高度保守的家族基因,它们的共同特点是都包含了一个高度保守的由79个氨基酸残基组成DNA结合结构域,即HMG-box(high mobility groupbox)。Sox基因作为一种转录调控因子,参与多种发育过程及性别分化的调控。
本研究采用普通PCR技术,克隆到马氏珠母贝3个DM结构域和1个HMG框,证明了Dmrt基因和Sox基因家族在马氏珠母贝中的存在。采用RACE-PCR的方法,克隆了马氏珠母贝的Dmrt2基因、Dmrt5基因和Sox14基因的全长cDNA序列。结果显示:马氏珠母贝的Dmrt2基因cDNA全长为100sbp,有一个836bp(75-910)的开放阅读框,编码278个氨基酸,它编码的氨基酸序列(22-435)与小鼠(Mus musculus)的Dmrt2基因(342-759)的一致性为54%,故命名为pmDmrt2。Dmrt5基因的cDNA全长为873bp,有一个621bp(127-747)的开放阅读框,编码206个氨基酸,所编码的氨基酸序列(46-186)与剑鱼(Xiphophorus maculatus)的Dmrt5(45-183)的一致性达91%,故命名为pmDmrt5。Sox14基因的cDNA全长为1631bp,有一个1008bp(144-1151)的开放阅读框,编码336个氨基酸,所编码的氨基酸序列(171-635)与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)的Sox14基因(69-564)的一致性为56%,故命名为pm Sox14。
采用RT-PCR技术对以上基因进行表达图谱分析,结果显示:马氏珠母贝的Dmrt2基因在雄性性腺中特异表达,具体时序则是从雄性性腺发育早期开始表达,雄性成熟期表达量较多,雄性向雌性转化期表达量渐少,到雌性早期只有微量表达,最后到雌性成熟期不再表达,可初步判断马氏珠母贝Dmrt2基因在性别决定与分化过程中起重要作用。马氏珠母贝的Dmrt5基因在鳃、外套膜、闭壳肌、消化盲囊和雌性性腺中都有表达,但在雄性性腺中的表达量最高;在三月幼贝性腺、雄性向雌性转化期性腺、发育早期雌性性腺、成熟期雌性性腺都有表达,但在早期雄性性腺、成熟期雄性性腺中表达量较多。马氏珠母贝的Sox14基因除在闭壳肌和雌性性腺中表达量较少外,在其他组织中的表达量相差无几;且在性腺发育各个时期都有表达,但在雌性早期和雌性成熟期表达量较少。
采用原位杂交技术确定Dmrt2基因在性腺中的具体的定位信息,结果显示:马氏珠母贝的Dmrt2基因只在精原细胞、精母细胞和精子细胞中表达,在精子中几乎没有表达,在各个时期卵子中均不表达。进一步证实马氏珠母贝的Dmrt2基因在性别决定与分化过程中起重要作用。本研究证实,马氏珠母贝的Dmrt2基因、Dmrt5基因和Sox14基因与其他动物的相应基因间存在高度的同源性,尤其是DM结构域和HMG框序列。其中,pmDmrt2基因参与马氏珠母贝性别决定与分化,pmDmrt5和pmSox14基因参与马氏珠母贝胚胎发育其他过程,是否也与性别决定和分化有关,有待于进一步的研究。