三种冷激蛋白重组克隆研究

来源 :东北师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wfj0808
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若将正处于对数生长期的大肠杆菌从生理环境(37℃)转入低温环境(10-15℃)培养,细菌细胞生长受到抑制。此时,细胞中绝大多数蛋白质的合成突然停止,细胞进入停滞期;然而,这个停滞期是暂时的,大约在2-4h后,细胞的生长就可恢复正常。在停滞期,细胞迅速合成26种冷激蛋白。这些冷激蛋白在细胞恢复转录和翻译过程中起到非常重要的作用。 CspA蛋白家族是1987年Jones等人在大肠杆菌中发现的,该类蛋白是研究最多的一类冷激蛋白。根据序列同源性,Jones等找到了包括CspA在内的9个家族成员,分别命名为CspA-Cspl,这9种冷激蛋白中,仅有CspA、CspB、CspG和CspI可以被低温暂时冷激诱导,在冷激后处于停滞期的大肠杆菌中,转录、mRNA稳定性及翻译水平等方面都受到这4种冷激蛋白的调节。本论文以pET28a(+)为骨架构建含有cspA、cspB和cspG基因编码区DNA片段的表达载体,将三种表达载体分别转入低温缺陷型菌株BX△AG中,检测常温及低温条件下三种重组菌株与缺陷型菌株的生长情况。利用统计学软件SPSS11.5对比分析三种重组菌株相对于缺陷型菌株的生长水平差异。同时,分别在16℃和37℃下表达(加入或不加入IPTG诱导作为对照)三种重组菌株;利用SDS-PAGE分析比较BX△AG-pET28(+)a-cspA、BX△AG-pET28(+)a-cspB和BX△AG-pET28(+)a-cspG表达水平差异。 实验结果显示:在16℃温度条件下BX△AG-pET28(+)a-cspB恢复生长最为显著,BX△AG-pET28(+)a-cspA也可以恢复生长;BX△AG-pET28(+)a-cspG不可以恢复生长。缺陷型菌株和重组菌株的蛋白表达水平差异发现37℃和16℃条件下四者差别不大。
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