论文部分内容阅读
第一部分：研究TPL对淋巴细胞来源的血液系统恶性肿瘤细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡的情况目的：研究和比较TPL对T细胞和B细胞来源的血液系统恶性肿瘤细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡的情况。从而为进一步研究TPL的肿瘤杀伤机制打下基础。方法：MTT法检测TPL的生长抑制作用,AV/PI流式细胞检测术检测TPL诱导细胞凋亡情况,Western-blot法检测TPL作用后caspase-3、PARP蛋白的表达情况,Western-blot法检测4种细胞株相关基因蛋白的表达情况。结果：(1)0～320nmol/L的TPL作用细胞株Jurkat、Molt-4、L428、Raji24小时后,IC50分别是79.76、48.34、1862、124.36nmol/L,作用48小时后IC50分别是47.27、7.12、224.2.13、19nmol/L。表明T细胞来源的细胞株对TPL敏感,而B细胞来源的细胞株不敏感。(2)80nmol/L的TPL分别作用细胞株12小时后,AV/PI流式术检测显示早期凋亡率分别为：Jurkat:26.72%, Molt-4:16.29%, L428:2.76%,Raji:6.67%。提示TPL可显著诱导T细胞来源的血液系统恶性肿瘤细胞株凋亡,而对B细胞来源的细胞株不敏感。(3)TPL诱导T细胞来源的血液系统恶性肿瘤细胞凋亡时,caspase-3、PARP蛋白激活,而B细胞来源的细胞株caspase-3、PARP不激活。(4)在T淋巴细胞来源的细胞株Molt-4、Jurkat中,IκK-α、p-AKT、Bcl-2等蛋白高表达；而蛋白IκB、Bad在细胞株Molt-4、Jurkat、Raji中高表达。其余蛋白表达差异不明显。第二部分：研究TPL诱导Molt-4细胞凋亡的机制以及microRNAs在其中的作用目的：进一步研究TPL诱导T-ALL细胞株Molt-4凋亡的潜在机制,以及microRNAs在其中的作用。从而为T-ALL的治疗提供更为有效的药物打下基础。方法：AV/PI流式细胞检测术检测TPL诱导Molt-4细胞凋亡的作用。Hoechst染色法观察TPL诱导Molt-4细胞凋亡的形态学改变。Western-blot法检测TPL作用前后核蛋白NF-κB以及其他通路蛋白的变化情况。免疫荧光法检测TPL作用前后核内NF-κB蛋白表达的情况。MicroRNA芯片检测TPL作用Molt-4细胞后microRNAs的改变。Real-time PCR验证TPL作用后microRNAs改变的情况。转染mir-16-1*类似物后,通过FACS知western-blot法检测TPL诱导Molt-4细胞凋亡的改变。结果：(1)TPL可有效诱导Molt-4细胞凋亡,且具有浓度依赖性。(2)TPL诱导Molt-4细胞凋亡时,细胞核可见凋亡小体,且凋亡小体数量随TPL浓度增加而增加。(3)TPL可使Molt-4细胞NF-кB下调,而L428细胞无明显变化。(4)TPL作用Molt-4细胞后,具有统计学意义(P<0.05)改变的microRNAs有23个,其中6个下调,17个上调。(5)TPL使Molt-4和Jurkat细胞mir-16-1*下调、mir-138-2*上调,且呈浓度依赖性和时间依赖性。(6)Mir-16-1*类似物可降低TPL引起的早期凋亡率,同时可降低caspase-3和PARP蛋白的激活水平。结论：低浓度的TPL(20～160nmol/L)可明显抑制T细胞来源的血液系统恶性肿瘤细胞株Molt-4、Jurkat生长并诱导凋亡,但对B细胞来源的细胞株L428、Raji不敏感。TPL诱导T-ALL细胞株Molt-4细胞凋亡可能与下调NF-κB和mir-16-1*有关。TPL可作为有效治疗T-ALL乃至T细胞来源的血液系统恶性肿瘤的药物。