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第一部分:鞘内注射BDNF小干扰RNA缓解大鼠炎性痛目的观察在炎性痛大鼠模型鞘内注射BDNF小干扰RNA(si RNA)后对其痛域的影响。方法将SPF级雌性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,体重150~180g,随机分为6组(n=12):control组,为模型对照组;control+BDNFsi RNA组,为模型对照组+BDNF小干扰RNA(si RNA)鞘内给药组;CF鞘内注射BDNFA组,为炎性痛组;CFA+mismatch组,为炎性痛组+错配的si RNA鞘内给药组;CFA+jet PEI组,为炎性痛组+转染剂jet PEITM鞘内给药组;CFA+BDNFsi RNA组,为炎性痛组+BDNFsi RNA鞘内给药组。将体外培养小胶质细胞分为3组:溶媒组,阴性对照组和BDNFsi RNA组,转染后,再使用Real-Time PCR和Westernblot法筛选体外小胶质细胞转染的BDNFsi RNA。完全弗氏佐剂(CFA)造模后1~3天,分别鞘内注射BDNFsi RNA、错配的si RNA及转染剂jet PEITM,si RNA用量2.6μg/10μl,每天1次。分别于造模前及造模后隔日测定大鼠热缩足反射潜伏期(PWLT);并于第一天注药后连续测定24h(1h、2h、3h、4h、5h、6h、12h、24h)。然后,每组各另取4只大鼠,造模后第三天测痛。结果Real-Time PCR结果显示BDNFsi RNA组的BDNFm RNA的表达低于溶媒体组和阴性对照组;Westernblot结果显示BDNFsi RNA组的BDNF表达低于溶媒体组和阴性对照组。炎性造模后第1~14天,与control组相比,CFA组、CFA+mismatch组,CFA+jet PEI组的PWLT值显著降低;而炎性造模后第3天,与CFA组、CFA+mismatch组、CFA+jet PEI组比较,CFA+BDNFsi RNA组PWLT值显著增高。结论在炎性痛大鼠模型鞘内注射BDNF小干扰RNA后,大鼠痛域显著降低第二部分:脑源性神经营养因子通过脊髓Akt信号通路参与大鼠炎性痛目的观察鞘内注射BDNF小干扰RNA(si RNA)对脊髓背角BDNF的下游丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号转导通路的作用及在炎性痛中的可能机制。方法将SPF级雌性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠60只,体重150~180g,随机分为6组(每组n=12):control组,为模型对照组;control+BDNFsi RNA组,为模型对照组+BDNF小干扰RNA(si RNA)鞘内给药组;CFA组,为炎性痛组;CFA+mismatch组,为炎性痛组+错配的si RNA鞘内给药组;CFA+jet PEI组,为炎性痛组+转染剂jet PEITM鞘内给药组;CFA+BDNFsi RNA组,为炎性痛组+BDNFsi RNA鞘内给药组。将体外培养小胶质细胞分为3组:溶媒组,阴性对照组和BDNFsi RNA组,转染后,再使用RealTime PCR和Westernblot法筛选体外小胶质细胞转染的BDNFsi RNA。完全弗氏佐剂(CFA)造模后1~3天,分别鞘内注射BDNFsi RNA、错配的si RNA及转染剂jet PEITM,si RNA用量2.6μg/10μl,每天1次。每组取4只大鼠,造模后第三天处死,测定脊髓后角p-Akt表达水平(Western Blot)。结果大鼠炎性痛造模后第3天,脊髓后角p-Akt的蛋白表达显著增加(P<0.01);control+BDNFsi RNA组脊髓p-Akt较对照组无显著差异(P>0.05);与CFA组、CFA+mismatch组、CFA+jet PEI组比较,CFA+BDNFsi RNA组的脊髓p-Akt的蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论BDNF可能通过Akt信号通路产生炎性痛。