抗生素的滥用致使细菌耐药性的产生、药物残留等乳品安全问题尤为突出。噬菌体具有独特的杀菌机制、高度宿主特异性和安全性等优势,有望成为治疗奶牛细菌性乳房炎的一种新的手段。本研究以实验室保存的6株大肠杆菌(K2、Hm4、7140、7525、4525、4818)为宿主菌,与经过预处理的奶牛场污水样混合孵育,离心过滤获得噬菌体原液。首先,采用双层平板法和点滴法对获得的噬菌体原液进行筛选和验证;其次,对噬菌体分离株进行纯化、富集浓缩,透射电镜观察其形态结构特征,通过MOI、一步生长曲线、最适生长温度、最适生长pH、SDS-PAGE蛋白组分、基因组核酸类型等鉴定噬菌体分离株的生化特性;最后,利用高通量测序技术对噬菌体分离株的全基因组进行测序,通过序列组装、评估、功能注释和预测、进化树分析等进行生物信息学分析。结果如下:噬菌体分离株:以大肠杆菌Hm4和7140为宿主菌,成功分离得到2株大肠杆菌噬菌体,分别命名为Hm4噬菌体和7140噬菌体;透射电镜结果:2株噬菌体的头部呈正二十面体,具有可收缩性尾鞘、尾丝,属于肌尾科噬菌体;生化特性结果:2株噬菌体的最佳感染复数均为10-3,最适温度为40～50℃、最适pH为5～10;Hm4噬菌体和7140噬菌体潜伏期分别为10 min、5 min,裂解期分别为60 min、45 min,裂解量分别为 24 PFU/mL、12 PFU/mL;生物信息学分析:2株噬菌体的核酸为ds DNA;Hm4噬菌体基因组全长168,370 bp,GC含量为31.6%,具有10种t RNA和1 1种酶切位点,注释后得到277个CDS,524个ORF;7140噬菌体基因组全长169,642 bp,GC含量为37.58%,具有2种t RNA和1 1种酶切位点,注释后得到270个CDS,704个ORF。2株噬菌体均未发现含有抗性基因与毒力基因。