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目的:本实验以体外培养的细粒棘球蚴原头节为研究对象,观察维甲酸(RA)对细粒棘球蚴原头节内Nrf2信号通路的抑制作用,并进一步探讨Nrf2信号通路抑制后体外对细粒棘球蚴原头节的作用。方法:无菌条件下,从自然感染细粒棘球蚴病的绵羊肝脏中获取细粒棘球蚴原头节,并置RPMI 1640培养基中体外培养。将不同浓度的RA(2、4、6、8和10μmol/L)体外作用于细粒棘球蚴原头节,并设立空白对照组。采用共聚焦免疫荧光技术检测原头节内Nrf2的定位及表达变化;通过WST法及ELISA法测定RA作用后原头节GST及HO-1的活性变化。各组原头节经0.1%伊红溶液染色后于光镜下观察活力及形态变化,实验独立重复3次,并绘制活力曲线。用扫描电子显微镜(SEM)观察原头节表面超微结构改变。不同浓度RA作用原头节24h、48h后,用caspase-3检测试剂盒检测caspase-3酶活性。结果:免疫荧光定位表明Nrf2绿色荧光主要分布于细粒棘球蚴原头节的细胞质中,8μmol/LRA作用后,绿色荧光强度及定位均未见明显改变。RA作用后的原头节GST和HO-1活性均显著下降(P<0.05),且呈时间及剂量依赖性。不同浓度RA均有抑制原头节生长的作用,以8μmol/L和10μmol/LRA对原头节杀伤作用较明显,至培养第5d,8μmol/L组原头节活力仅为9.58%,而10μmol/L组原头节已全部死亡。随着药物作用时间的延长,RA对原头节的杀伤作用越明显。SEM观察显示,RA可明显破坏原头节表面超微结构,引起虫体表层塌陷、顶突变形及微毛脱落,当药物浓度及作用时间增加后,损伤加重,出现顶突界面缺损、吸盘变形,体表还可见大量虫蚀样改变及指状突起。此外,不同浓度RA作用原头节24h、48h后,caspase-3酶活性较正常对照组显著增高(P<0.05)。结论:1.维甲酸可有效抑制细粒棘球蚴原头节内Nrf2调控的下游GST、HO-1的活性,但对Nrf2的表达水平没有影响。2.维甲酸体外作用可明显抑制细粒棘球蚴原头节生长,促进其凋亡。