【摘 要】
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目的:建立在酿酒酵母细胞(S.cerevisiae)中对HEV ORF2基因重组蛋白的表达及纯化方法,并对表达产物进行初步鉴定.材料与方法:将PCR扩增的核苷酸序列为6326-7129nt的HEV ORF2片
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目的:建立在酿酒酵母细胞(S.cerevisiae)中对HEV ORF2基因重组蛋白的表达及纯化方法,并对表达产物进行初步鉴定.材料与方法:将PCR扩增的核苷酸序列为6326-7129nt的HEV ORF2片断,克隆到酵母表达载体YEpFLAG-1中构建成YEpFLAG-1-HEV-ORF2,并用该重组载体转化酿酒酵母细胞BJ3505株.挑取阳性克隆,增菌后在YPHSM培养基中表达约72小时.表达产物离心后将细胞沉淀用高压均质机破碎,破碎后产物离心,取上清用不同方法进行纯化,并通过SDS-PAGE、ELISA和免疫动物等方法,对纯化后的重组表达蛋白的纯度和特异性进行初步鉴定.结果:本实验成功地构建了重组表达载体YEpFLAG-1-HEV-ORF2,并在酿酒酵母细胞株中表达了HEV ORF2基因重组蛋白,获得了纯度较高、抗原性和特异性较好的该重组蛋白.结论:用酵母细胞BJ3505株表达HEV ORF2基因重组蛋白及用CSFF纯化蛋白的方法及操作可行,所获得的HEVORF2重组蛋白可用于HEV诊断试剂及HEV基因重组疫苗的研制.
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