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研究背景:恶性肿瘤是威胁人类生存期的严重公共卫生问题之一,均易出现远处器官的转移,中枢神经系统则是其常见靶器官之一。经静脉注射化疗药、口服分子靶向药等传统治疗手段均难以使大分子结构通过血脑屏障（blood brain barrier,BBB）,局部放射治疗逐渐成为颅内原发或转移瘤多的常用治疗手段,包括全脑放疗（whole brain radiation therapy,WBRT）、适形调强放疗（Intensity-modulated radiatio therapy,IMRT）及三维适形放疗（Three dimensional conformal,3D-CRT）等方式,同时亦不可避免的导致了放射性脑损伤（radiation-induced brain injury,RBI）的发生。RBI急性期与早期延迟期主要表现为脱髓鞘导致的全身无力、嗜睡,及放射相关性脑水肿诱发的颅高压等症状。晚期则表现为局部或弥漫性神经元坏死导致的放射性坏死（radiation necrosis,RN）,及认知功能障碍、情感障碍及记忆减退。RBI并非由单一因素引起,其机制较为复杂且仍存在争议。目前血管源性损伤、胶质细胞损伤、神经炎症反应及氧化应激等学说得到了广泛认可。其中占据主导地位的是以血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）病理性高表达为核心的放射相关性血管源性损伤。贝伐珠单抗（Bevacizumab）是一种抗VEGF的单克隆抗体,可通过竞争性抑制阻断VEGF与其特异性受体血管内皮细胞生长因子受体（vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR）结合。临床工作中常用于缓解放疗后VEGF相关性脑水肿,已广泛应用于急性期RBI的治疗。安罗替尼（Anlotinib）是由我国自主研发的多靶点小分子酪氨酸蛋白激酶抑制剂,相较于贝伐珠单抗,其作用靶点更为广泛,同时对VEGFR2具有高选择性,可高效拮抗VEGF病理性高表达所导致的毒性作用。基于此,本研究将详细探究安罗替尼对RBI小鼠脑水肿的治疗作用。研究目的:构建小鼠急性期RBI模型,并使用ELISA法判定模型的构建;使用不同浓度的安罗替尼混悬液对发生急性RBI的小鼠进行实验性药物灌胃治疗,以探究安罗替尼对放射相关性脑组织水肿、神经元脱髓鞘、胶质细胞活化、脑组织乏氧等改变的治疗作用。材料与方法:选取6-8周龄,体质量为20±5 g的SPF级C57雄鼠共54只,将小鼠随机分为空白对照组、单纯照射组、安罗替尼低剂量组、安罗替尼高剂量组,直至实验前恒温饲养、自由进食。采用单次分割大剂量照射方案构建小鼠急性RBI模型。于照射前使用戊巴比妥腹腔注射以麻醉小鼠（50 mg/kg）,待小鼠麻醉后使其俯卧于治疗台,20 Gy X线照射小鼠整个颅脑（照射范围为双侧内眦连线至双耳连线区域）。全脑照射后,除空白对照组,分别使用浓度为0,0.2,0.8 mg/kg的安罗替尼混悬液给予单纯照射组、安罗替尼低剂量组及安罗替尼高剂量组的小鼠经胃灌药,连续使用14天,并在全脑照射后第3、7、14天时解剖小鼠颅脑取材。采用ELISA法判定小鼠急性期RBI模型是否成功构建;干湿组织称重法量化小鼠放射相关性脑组织水肿程度;LFB特殊染色法观察小鼠脑组织内神经元脱髓鞘情况;采用Westen blot法测定急性期RBI小鼠脑组织中VEGF、p-VEGFR2、HIF-1α、GFAP表达水平及变化趋势。结果:20 Gy全脑照射后即可观测到受照射的小鼠脑组织内S100B蛋白表达水平异常增高,此现象证实单次分割大剂量照射方案即可成功构建小鼠急性期RBI模型;采用干湿组织称重法量化小鼠放射相关性脑组织水肿。结果表明,安罗替尼可显著减少受照射小鼠脑组织的含水量,缓解放射相关性脑组织水肿;取小鼠脑组织制作石蜡切片,LFB特殊染色法观察照射后小鼠脑组织内神经元脱髓鞘损伤,可于镜下观察到受照射的小鼠脑髓鞘结构断裂、紊乱,安罗替尼未能改善小鼠脑神经元脱髓鞘损伤;使用免疫组织化学染色法对小鼠脑组织内星形胶质细胞进行特异性染色标记,结果显示:受照射的小鼠脑组织内均可见GFAP 阳性表达,星形胶质细胞活跃性增高,且该效应呈时间依赖性,使用安罗替尼干预后,GFAP的表达可见明显下调,并呈剂量依赖性;使用Western blot法测定照射后小鼠脑组织内VEGF、p-VEGFR2、HIF-1α、GFAP的表达水平,结果显示:安罗替尼可下调p-VEGFR2、GFAP及HIF-1α的表达,并呈时间-剂量依赖性,但可能会导致VEGF的负反馈性分泌增加。结论:1.安罗替尼可通过拮抗VEGF/VEGFR2通路的磷酸化作用改善VEGF病理性高表达导致的放射性相关性脑组织水肿。2.安罗替尼无法缓解放射治疗后脑神经元脱髓鞘损伤。3.安罗替尼可通过减轻脑水肿、改善微循环、降低星形胶质细胞的活化程度以降低脑组织内耗氧量,改善放射相关性脑组织乏氧状态。4.安罗替尼有可能会导致RBI急性期脑组织内VEGF的负反馈性高表达。