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大肠杆菌0157：H7是一种重要的人兽共患病病原菌,氟苯尼考能防治大肠杆菌0157：H7引起的疾病,但是大肠杆菌0157：H7对氟苯尼考产生的耐药现象也日趋严重。本研究旨在探讨大肠杆菌0157：H7产生对氟苯尼考耐药性的机理,为减缓细菌对氟苯尼考耐药性的产生和为临床提供更好地抗菌药物奠定基础。本研究测定氟苯尼考对2株大肠杆菌0157：H7的体外最小抑菌浓度(MIC)、防突变浓度(MPC)、耐药突变选择窗(MSW)和选择指数(SI)。采用亚抑菌浓度体外耐药诱导法将大肠杆菌O157：H7由氟苯尼考高度敏感诱导成耐药,并建立氟苯尼考对肠杆菌科细菌敏感性的判定依据。以大肠杆菌0157：H7氟苯尼考敏感菌及其耐药诱导菌为研究对象,采用PCR方法和环介导等温扩增(LAMP)方法对提取的质粒进行氟苯尼考耐药基因(floR)的检测；通过质粒的转化、接合转移和消除证实该质粒是否与氟苯尼考耐药有关；并对大肠杆菌0157：H7氟苯尼考外排泵表型进行检测。试验结果显示,氟苯尼考对大肠杆菌O157:H7RS2和FC1菌株的MIC为4μg/mL,MPC为7.6μg/mL,MSW为4μg/mL～7.6μg/mL,SI为1.9。大肠杆菌O157:H7RS2和FC1菌株分别经32代和36代的人工体外耐药诱导,氟苯尼考对RS2和FC1菌株的MIC从4μg/mL升高至256μg/mL。建立了氟苯尼考对肠杆菌科细菌的体外抑菌试验结果判定的依据：MIC≤8μg/mL,判定为敏感,MIC为16μg/mL,判定为中介,MIC≥32μg/mL,判定为耐药。琼脂糖凝胶电泳方法检测质粒结果显示,氟苯尼考耐药诱导菌均含有两个大小约为1,200bp和3,500bp的质粒带。LAMP检测和PCR检测结果表明,氟苯尼考耐药基因floR位于大肠杆菌0157：H7氟苯尼考敏感菌株和耐药诱导菌株的质粒中。将大肠杆菌0157：H7氟苯尼考耐药菌的质粒转化或接合转移至对氟苯尼考敏感的同种属(科)菌和不同种属(科)菌,结果表明,受体菌对氟苯尼考的耐药性升高,其MIC提高16-64倍。PCR检测结果显示,质粒转化前受体菌均未检测到floR基因,质粒转化后的阳性受体菌均检测到floR基因。大肠杆菌O157：H7氟苯尼考耐药菌在无氟苯尼考压力下连续传代培养200代,氟苯尼考对菌株的MIC从256μg/mL降低至8μig/mL,由高水平耐药恢复到敏感水平。传代菌的质粒没有丢失,但是floR基因的拷贝数从0.768ng/μL下降至0.166fg/μLSDS-温度交替法对大肠杆菌0157：H7氟苯尼考耐药株有部分质粒消除作用,氟苯尼考对菌株的MIC从256μg/mL降低至64μg/mL,菌株的质粒带没有丢失。在外排泵抑制剂氰氯苯腙(CCCP)、奥美拉唑钠和利血平的作用下,氟苯尼考对大肠杆菌0157：H7氟苯尼考敏感菌MIC降低2-8倍,对耐药菌的MIC降低2～32倍；表明大肠杆菌0157：H7存在ATP水解依赖型外排泵和质子能驱动型外排泵。本研究结果初步表明携带floR基因的质粒是大肠杆菌0157：H7产生氟苯尼考耐药性的一个原因。