【摘 要】
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目的将SD雌性大鼠通过来曲唑诱导为多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）模型,在大鼠卵泡液中获取卵巢颗粒细胞（ovarian granulosa cells,OGCs）,建立OGCs在体外的培养体系,对PCOS组大鼠OGCs进行药物干预后测定增殖与凋亡率,对比各组细胞与凋亡有关基因的mRNA表达。证实Nesfatin-1及Wnt/β-catenin信号通路对
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目的将SD雌性大鼠通过来曲唑诱导为多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）模型,在大鼠卵泡液中获取卵巢颗粒细胞（ovarian granulosa cells,OGCs）,建立OGCs在体外的培养体系,对PCOS组大鼠OGCs进行药物干预后测定增殖与凋亡率,对比各组细胞与凋亡有关基因的mRNA表达。证实Nesfatin-1及Wnt/β-catenin信号通路对OGCs有影响,探讨它们与PCOS发病的相关性。方法6周龄大鼠30只,分为PCOS组和非PCOS组,PCOS组大鼠连续21天给予来曲唑1mg/kg;非PCOS组大鼠给予相等容积的羧甲基纤维素钠水溶液。每日观察各组阴道脱落细胞形态,推断所处的动情阶段;同时每间隔3日对大鼠称重。大鼠各血清性激素及Nesfatin-1水平的检测依赖于ELISA法;对比观察HE染色后的两组大鼠卵巢。获取大鼠OGCs进行培养,在PCOS组分别加入Nesfatin-1及IWR-1（一种新合成的针对Wnt/β-catenin通路的选择性抑制剂）药物干预,采用细胞增殖-毒性检测及流式法分别测定OGCs增殖、凋亡情况;通过qRT-PCR,从mRNA水平分析与细胞凋亡相关基因的表达。结果（1）在来曲唑诱导结束后,PCOS组大鼠体重增加明显,一直处于发情间期,卵巢组织内大卵泡呈空泡状、可见囊性扩张。（2）大鼠血清T、P在PCOS组水平较高,差异明显;而两组E2、FSH、LH差异不明显。Nesfatin-1浓度在PCOS组大鼠血清较低。（3）用IWR-1和Nesfatin-1分别对PCOS组大鼠OGCs干预24h、48h后,发现两干预组大鼠OGCs增殖率增高,凋亡率下降。（4）两干预组基因Bax、Bim及P27的mRNA均低表达,Bcl-2 mRNA高表达。而IWR-1干预组OGCs中Foxo3a mRNA表达上升;Nesfatin-1干预组Foxo3a mRNA低表达。结论（1）来曲唑药物干预SD雌性大鼠是构建PCOS动物模型比较理想可行的方法。（2）在来曲唑诱导的PCOS大鼠模型中能够获取到OGCs,并可以建立OGCs体外培养体系,应用于后续实验。（3）Nesfatin-1及Wnt/β-catenin通路抑制剂IWR-1均能抑制大鼠OGCs凋亡并促进其增殖。（4）Nesfatin-1会影响Wnt/β-catenin通路中Foxo3a及其下游因子的表达。
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