本研究将采用逐层递进，层层深入的方式，从血清维生素D在不孕症人群中的分布水平及相关因素的研究，到卵泡液维生素D水平与辅助生殖技术中受精、胚胎质量的关系探讨，最后进一步研究维生素D代谢通路相关基因的表达，以期为不孕症处理及更好的提高临床妊娠率提供线索。　　第一部分 维生素D水平与不孕症人群相关因素分析　　目的:　　研究血清中维生素D在不孕症人群中的分布水平，分析维生素D水平与不孕症患者基本情况及实验室相关指标的关系。　　材料与方法:　　1.研究对象　　(1)回顾性分析2016年6月～2018年12月郑州大学第三附属医院生殖医学中心第一次接受辅助生殖技术助孕治疗的不孕症患者，共计12261例。　　(2)病例纳入标准:因输卵管因素、排卵障碍、子宫内膜异位症、卵巢早衰、复发性流产、男方因素（重度少弱畸精症、无精症）、不明原因而行夫精人工授精和供精人工授精、体外受精、卵胞浆内单精子显微注射、胚胎植入前遗传学诊断、胚胎植入前遗传学筛查的患者。排除标准:有辅助生殖助孕技术禁忌症者;近半年内补充维生素D药物史者;严重的内科疾病如高血压、糖尿病者。　　(3)分组情况:根据血清25(OH)D水平分成两组:VD缺乏组(25(OH)D≤50nmol/L)，VD非缺乏组(25(OH)D＞50nmol/L)。其中缺乏组10077例，非缺乏组2184例。　　2.研究方法　　(1)记录患者的基本情况，包括:年龄、不孕年限、体重指数、血压、家族史;测定实验室指标包括:血型、肝肾功能、空腹胰岛素水平、血清25(OH)D水平及测定时间、基础内分泌、临床诊断包括是否有PCOS、子宫内膜异位症等。　　(2)统计方法:所有的数据均采用SPSS21.0统计软件进行整理并作出分析，基础信息资料采用均数±标准差（(x)±s）来表示。对于分类变量使用卡方检验组间进行比较，如果超过20％的期望值小于5，则采用Fisher精确检验。对于连续变量，根据是否服从正态性和方差齐性采用Students t检验或Mann-Whitney检验，多因素分析均采用logistic回归。以α=0.05为检验水准。　　结果:　　1.VD缺乏组与非缺乏组两组间比较，女方BMI、血型、家族史和是否有子宫内膜异位症均无显著性差异。　　2.VD缺乏组10077例，占82.19％，非缺乏组2184例，占17.81％。　　3.VD缺乏组与非缺乏组在年龄、VD测定季节、胰岛素抵抗、PCOS方面差异有统计学意义。　　4.(1)BMI、PCOS、血型、家族史、子宫内膜异位症不影响维生素D水平。　　(2)高龄（＞35岁）是维生素D的保护性因素:≤35岁女性较＞35岁更易维生素D缺乏。　　(3)维生素D测定季节影响其水平:夏秋季维生素D水平明显高于冬春季，春季明显高于冬季。　　(4)胰岛素抵抗影响维生素D水平:胰岛素抵抗较非胰岛素抵抗组更易维生素D缺乏。　　小结:　　不孕症患者多存在维生素D缺乏;维生素D水平受女方年龄、测定季节、胰岛素抵抗的影响;BMI、PCOS、血型、家族史、子宫内膜异位症不影响维生素D水平。　　第二部分 维生素D水平与ART助孕获卵及胚胎质量关系的探讨　　目的:　　探讨血清和卵泡液中维生素D水平的相关性;评估卵泡液中维生素D水平与获卵率、正常受精率（2PN率）、优质胚胎率（简称优胚率）的关系。　　材料与方法:　　1.研究对象　　(1)选取2018年12月～2019年1月于郑州大学第三附属医院生殖医学中心接受IVF助孕的196例患者为研究对象。　　(2)病例纳入标准:女方年龄≤35岁，男方年龄:＜40岁，抗苗勒管激素(AMH)＞1.1 ng/ml或者基础窦卵泡数＞7个，均采用长方案（包括黄体中期长方案和长长方案）。病例排除标准(1)严重的内科疾病; (2)合并其他影响代谢的内分泌疾病（如甲状腺疾病、高催乳素血症等）; (3)子宫内膜异位症; (4)近半年内补充维生素D药物史者。　　(3)分组情况:根据卵泡液中维生素D水平划分为三组:VD充足组(34例):25(OH)D≥75 nmol/L，VD不足组:50 nmol/L＜25(OH)D＜75 nmol/L，VD缺乏组:25(OH)D≤50 nmol/L。　　2.研究方法　　(1)记录患者一般情况、测定空腹胰岛素、血清和卵泡液中25(OH)D水平及性激素包括LH、FSH、E2、P等水平，记录获卵数、正常受精数、胚胎质量等。　　(2)统计方法:定量资料采用Shapiro-Wilk法进行正态性检验，符合正态分布的定量资料以均数±标准差（(x)±s）来表示，组间比较采用两独立样本均数的t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD法;不符合正态分布的定量资料以中位数和四分位数[M (P25，P75)]表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。定性资料以率表示，组间比较采用卡方检验。以α=0.05为检验水准。　　结果:　　1.VD缺乏组、不足组与充足组相比较，除血型外，其余均无显著性差异。　　2.血清和卵泡液中维生素D水平呈正相关，相关系数为r=0.832。　　3.VD缺乏组、不足组与充足组，三组间及两组间比较差异均无统计学意义。　　4.(1) VD缺乏组与充足组比较，两者2PN率无显著性差异，但对于优胚率，VD缺乏组明显低于充足组。　　(2)VD缺乏组2PN率及优胚率均显著性低于VD不足组。　　(3)VD不足组2PN率和优胚率与充足组相比无统计学意义。　　小结:　　血清25(OH)D水平可反映卵泡液中25(OH)D水平。维生素D水平不影响获卵率，但会对2PN率、优胚率产生影响。　　第三部分 维生素D水平与其代谢通路相关基因表达关系的研究　　目的:　　测定卵泡颗粒细胞内维生素D代谢通路相关基因CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR mRNA表达水平，探讨血清维生素D水平、PCOS、胰岛素抵抗与维生素D代谢通路相关基因表达的关系。　　材料与方法:　　1.研究对象　　(1)收集2018年12月至2019年1月在郑州大学第三附属医院生殖医学中心接受IVF助孕治疗的196例患者资料，从中按照血清中维生素D水平高低选取69名患者，测定卵泡颗粒细胞中维生素D代谢通路相关基因mRNA表达。　　(2)分组情况:　　①根据血清25(OH)D水平，分成VD充足组: 25(OH)D≥75 nmol/L、VD不足组:50 nmol/L＜25(OH)D＜75 nmol/L、VD缺乏组:25(OH)D≤50 nmol/L。　　②根据多囊卵巢综合征（PCOS）疾病诊断标准分成PCOS组和非PCOS (non-PCOS);根据胰岛素抵抗(IR)的诊断标准，将PCOS分成:PCOS+ IR组和PCOS+non-IR组;将非PCOS组分成:非PCOS合并胰岛素抵抗组（简写non-PCOS +IR）（11例）和非PCOS未合并胰岛素抵抗简写（non-PCOS+non-IR组）（22例）。其中设定non-PCOS+ non-IR组为对照组。　　2.研究方法　　(1)测定扳机日血清25(OH)D水平;检测卵泡颗粒细胞中维生素D代谢通路基因CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR mRNA表达水平。　　(2)统计方法:计量数据采用(x)±s来表示，QPCRR原始CT值用2-ΔΔCT法来进行最终的mRNA相对表达量计算。组间数据对比利用单因素方差法(one-way ANOVA)进行分析，组间差异比较采用LSD-T检验。以α=0.05为检验水准。　　结果:　　1.VD缺乏组、不足组及充足组间患者年龄、BMI、不孕年限、AMH比较差异均无统计学意义。　　2.(1) VD缺乏组CYP2R1和VDR基因mRNA表达量低于充足组，差异有统计学意义。两组间CYP27B1、CYP24A1、GC基因表达比较差异无统计学意义。　　(2) VD不足组与缺乏组及充足组相比，维生素D代谢通路相关基因表达均无显著性差异。　　3.(1)两组间CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR mRNA表达无显著性差异。　　(2)PCOS+non-IR组CYP2R1高于PCOS+IR组，差异有统计学意义。VDR基因表达PCOS+non-IR组较PCOS+IR组有升高趋势，但差异无统计学意义。　　(3)PCOS+IR组CYP2R1和VDR的基因表达量均低于对照组，两组间CYP27B1、CYP24A1、GC mRNA表达无显著性差异。　　(4)non-PCOS组CYP2R1的表达量明显低于对照组，两组间CYP27B1、CYP24A1、GC、VDR mRNA表达无显著性差异。　　小结:　　血清维生素D水平与CYP2R1基因表达密切相关，CYP2R1表达的酶是维生素D代谢限速酶。CYP24A1、GC基因为维生素D代谢通路的下游基因，维生素D水平增加不能改变其表达。胰岛素抵抗是影响维生素D代谢通路相关基因表达的关键因素。