骨肉瘤是骨的最常见的原发性恶性肿瘤之一，多发生于青少年，恶性程度高。其特点是瘤细胞直接形成骨样基质，因此成骨细胞的恶性转化与骨肉瘤的发生有着密切的关系。肿瘤的发生是一个长期的、多阶段、多基因改变积累的过程，具有多基因控制和多因素调节的复杂性，而体外细胞转化是反映体内多阶段肿瘤发生过程的良好细胞模型，与体内细胞恶性转化有较好的相关性。体外细胞恶性转化实验旨在揭示某一类肿瘤在其发生、发展的各阶段，究竟有哪些基因发生了改变，以及以何种方式起作用，即找到该肿瘤癌基因谱(gene spectrum)，以期为该肿瘤的诊断及防治提供理论依据。 基因印迹指的是某些基因呈不遵从孟德尔定律的亲源依赖性单等位基因表达，其另一等位基因不表达或表达极弱，具有这种现象的基因被称为印迹基因。印迹的肿瘤相关基因为单等位基因表达，相当于功能上的单倍体，仅需一次突变就使该基因失活，因而更易发生肿瘤，增加了肿瘤的易感性。以往有关的研究多以单个或几个印迹基因为对象，所获结果虽有意义但对于认识肿瘤发生发展这样的复杂问题仍显不足。大量印迹基因在肿瘤发生中的参与环节仍有待进一步明确。因此探讨肿瘤细胞各种印迹基因的表达的改变对恶性肿瘤的防治有重要意义。为初步探讨在骨肉瘤发生过程中印迹基因群的表达改变，我们拟分两部分进行本课题，第一部分为建立人永生化成骨细胞hFOB1.19两阶段转化模型：我们采用化学致癌物N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)作为转化人永生化hFOB1.19细胞的启动剂，培养传代后加入促癌物佛波酯(TPA)诱导其恶性转化，并检测转化细胞的遗传学及生物学特性；第二部分是对人永生化hFOB1.19细胞恶性转化过程中印迹基因表达谱改变的研究：实验中我们收集了转化过程中5个不同时间点细胞，运用具有高通量平行处理特点的基因芯片技术对收集细胞的印迹基因表达谱进行分析。 主要结果和结论如下： 一、人永生化成骨细胞hFOB1.19两阶段恶性转化模型的建立 1．用1μg／ml MNNG为启动剂，200ng／ml TPA为促癌剂处理人永生化hFOB1.19细胞，获得恶性转化的成骨细胞。