论文部分内容阅读
目的目前已有多个研究发现,白介素6(IL-6)基因多态性是多种免疫相关疾病的易感基因。最近的研究显示,在过敏性呼吸系统疾病中,IL-6担当重要角色。有关数据显示,IL-6的表达同变应性鼻炎的发病之间存在一定的关系,本研究通过三部分实验来探讨IL-6基因多态性与中国汉族人群变应性鼻炎易感性之间是否相关性。方法(1)采用HE染色和免疫组织化学法分别检测45例变应性鼻炎患者下鼻甲组织、15例鼻中隔偏曲患者下鼻甲组织(对照组)的病理组织学变化以及IL-6的表达。(2)收集265例变应性鼻炎患者的外周静脉血及265例对照组的外周静脉血样本,对两组样本进行病例对照研究。提取血液样本中的DNA,并对DNA样本中IL-6基因的两个多态位点(rs1800795和rs1800796)进行基因分型,探讨IL-6的基因多态性与变应性鼻炎易感性的关系。基因分型采取PCR-RFLP和直接测序的法。(3) 利用Balb/c小鼠建立卵清蛋白致敏的变应性小鼠模型,按末次激发后处死时间分为6组(30min、1h、2h、6h、12h、24h),同时使用生理盐水作为对照组,每组各5只小鼠。取各组小鼠鼻黏膜组织,利用HE染色法检测各组小鼠鼻黏膜组织的病理组织学变化情况,western blot法检测IL-6在各组小鼠鼻黏膜组织中的表达情况。结果(1)HE染色结果表明,变应性鼻炎患者的鼻黏膜上皮组织发生部分脱落,视野下能够见到杯状细胞增生,组织存在水肿现象,腺体增生,血管扩张,在上皮组织间可见到医以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主的大量炎细胞浸润,其中还包括嗜碱性粒细胞、中性粒细胞等。对两组组织切片中嗜酸性细胞进行计数,结果表明变应性鼻炎组嗜酸性粒细胞浸润显著,为(31.92±2.95),正常对照组为(3.83±2.03),变应性鼻炎组明显高于正常对照组,两者相比差异显著(P=0.001<0.05); western blot检测结果表明,IL-6蛋白在变应性鼻炎患者鼻黏膜组织中的相对表达量为(0.40±0.16),而在正常对照组下鼻甲组织中的相对表达量为(0.26±0.14),变应性鼻炎组明显高于正常对照组(P=0.003<0.05)。(2)对IL-6基因多态性进行分析,结果表明IL-6 rs1800795等位基因频率在变应性鼻炎患者与对照组中存在显著差异(χ2=4.52,P=0.03)；多因素logistic回归分析表明,相较于G等位基因,IL-6rs1800795的C等位基因具有更高的变应性鼻炎发病风险,OR值为1.31(1.01～1.68)。(3) 动物行为学观察结果表明,变应性鼻炎小鼠模型造模成功；HE染色结果表明,各变应性鼻炎模型组小鼠的鼻腔黏膜上皮均出现不同程度的结构紊乱,同时还可见充血、水肿以及黏膜层增厚等现象,此外还伴有黏膜上皮组织坏死以及脱落等,纤毛上皮可见有融合现象出现,细胞核发生形变,形状不规则,柱状细胞以及杯状细胞增生,血管扩张并增生,大量肥大细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润。Western blot检测结果表明,各组小鼠鼻黏膜组织中均有IL-6蛋白的表达,其中在30 min组中的相对表达量为0.142±0.064,在1h组中的相对表达量为0.214±0.104,在2h组中相对表达量为0.274±0.092,在6h组中的相对表达量为0.324±0.122,然后随着时间的延长呈逐渐下降趋势,在12h组中的相对表达量为0.236+0.059,在24h组中的表达量为0.172±0.058。与对照组的相对表达量0.068±0.020相比,实验组小鼠鼻黏膜组织中IL-6蛋白的表达量较正常组增高。结论IL-6在变应性鼻炎患者鼻黏膜组织中呈高表达,且变应性鼻炎的易感性与IL-6基因多态性显著相关。