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目的:制备siRNA负载PCB与适配体共修饰脂质体用于肺部靶向给药,考察其对siRNA的递送能力,并与抗癌药物顺铂(DDP)联用,对其药效进行体内外水平的评价。方法:通过开环反应合成阳离子类脂质材料环氧烷胺衍生物EAAD(Epoxy Alkyl Amine Derivative),通过CB单体和溴引发剂的聚合反应合成羧酸甜菜碱两性离子聚合物PCB(Polymer Carboxybetaine),采用~1H-NMR、FTIR和LC-MS对其结构进行表征。用乙醇注入法和EDC/NHS方法制备AS1411-PCB-EAAD脂质体(Apt-CELs),对其粒径分布、Zeta电位、siRNA包封率及稳定性进行测定。将Apt-CELs-siRNA经喷雾冷冻干燥制备成干粉吸入剂,对其空气动力学粒径和siRNA负载能力等进行评价,用于后续体内实验。利用MTT法,流式细胞仪(FCM)和共聚焦显微镜(CLSM)对载体的安全性和其对细胞的摄取能力、在细胞内的定位与对细胞凋亡迁移的影响进行评价。采用RT-PCR和Western Blot技术检测STAT3基因及蛋白的表达水平。以DDP和siRNA联合作用的给药方式考察Apt-CELs-siRNA对A549细胞对DDP敏感性的影响。建立Luc-A549的裸鼠原位肺癌模型,利用小动物活体成像仪(Lumina II)考察尾静脉注射和肺部吸入这两种给药方式对载体在裸鼠体内分布的差异,并在DDP和siRNA联合给药期间监测肿瘤生长情况,评价其抗肿瘤效果,对各组裸鼠主要器官进行H&E染色观察其变化。结果:通过合成的EAAD和PCB成功制备了阳离子脂质体CELs,制备的Apt-CELs外形圆整、粒径均一,负载siRNA后其粒径也小于200 nm,带30 mV左右的正电荷,且对siRNA具有较高的包封率,体外抗RNA酶实验也表明脂质体能够很好的保护siRNA免受血清中RNA酶的降解。脂质体干粉吸入剂形态圆整,引湿性较低,物理粒径在10μm左右,空气动力学粒径为3μm左右,琼脂糖凝胶电泳结果表明喷雾冷冻干燥对siRNA稳定性无显著影响,可以用于后续肺部给药实验。载体安全性实验表明载体给药浓度在0~250μg/mL内对细胞活力没有影响,与lipofectamine 2000相比具有较低的细胞毒性,安全性良好。siRNA的细胞摄取结果显示不同的细胞和摄取时间对载体的摄取效果差异很大:A549细胞中Apt-CELs组4 h的摄取率就高达90%,在H1299细胞上CELs组8 h时的摄取效果最好,而巨噬细胞RAW264.7上载体组的摄取都低于40%;共聚焦定位实验表明我们的载体能递送siRNA至细胞质中,且在A549/RAW264.7共培养体系中能避免巨噬细胞的吞噬进入A549细胞,有利于后续药效的发挥。体外药效的结果表明,Apt-CELs-STAT3-siRNA转染细胞后,能够显著下调STAT3基因在mRNA和蛋白水平的表达,提高细胞的凋亡率,减弱细胞的迁移效率;经STAT3-siRNA转染后能显著提高细胞对顺铂的敏感性,且在H1299细胞中,STAT3-siRNA和PD-L1-siRNA具有一定的协同作用。荷瘤裸鼠和离体组织的荧光成像实验表明肺部吸入Apt-CEL能够将部分Cy5-siRNA递送至肺组织,荷瘤裸鼠的体内药效学实验表明DDP静脉注射和Apt-CELs-STAT3-siRNA肺部吸入的联合给药能够显著增强抑瘤效果,病理切片也说明联合给药后肺部组织趋于正常,且对肝肾也基本无明显损伤,安全性良好。结论:PCB与适配体共修饰脂质体的肺部给药系统能有效负载siRNA并具有优良的基因递送能力,显著下调相关蛋白的表达,Apt-CELs-siRNA通过肺部给药可有效增强DDP的抗肿瘤效果。