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目的:体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,利用阳离子脂质体介导的基因转染法建立稳定表达pcDNA3.1-IGF-1-BMSCs细胞株,并体外结合低血清培养基观察向成骨分化的能力,为骨缺损的基因治疗奠定基础;方法:1:(1)采用密度梯度离心法联合贴壁筛选法培养兔骨髓间充质干细胞,进行体外培养,并通过倒置显微镜及HE染色观察细胞生长情况,CD44、CD90鉴定细胞表形;(2)抗坏血酸、地塞米松及β-甘油酸钠联合向成骨细胞分化,碱性磷酸酶及茜素红染色鉴定成骨活性;2:(1)真核表达质粒pcDNA3.1-IGF-1的扩增纯化及鉴定;(2)建立稳定表达pcDNA3.1-IGF-1-BMSCs细胞株,免疫荧光法、RT-PCR及Western blot检测IGF-1表达;(3)MTT法绘制基因转染前后的细胞增殖曲线;(4)通过ELISA法、碱性磷酸酶及Von Kossa染色后对真核质粒pcDNA3.1-IGF-1转染后的兔BMSCs体外成骨活性进行定量分析;结果:1、(1)兔骨髓间充质干细胞生长状态良好,各代细胞形态基本一致;(2)抗坏血酸、地塞米松及β-甘油磷酸钠诱导组BMSCs ALP及钙结节表达阳性;2、(1)真核表达质粒pcDNA3.1-IGF-1扩增、纯化成功;(2)成功构建稳定表达pcDNA-3.1-IGF-1-BMSCs细胞株;(3)稳定转染IGF-1后细胞增殖能力增强;(4)稳定转染IGF-1后细胞碱性磷酸酶分泌旺盛,Von kossa染色后镜下钙结节计数转染组显著高于未转染及空质粒转染组(p<0.05);结论:1、通过密度梯度离心法联合贴壁筛选培养的方法,在体外分离培养出增殖能力强的兔骨髓间充质干细胞;2、真核质粒pcDNA3.1-IGF-1转染后的BMSCs体外诱导成骨活性强,能为组织工程骨的研究提供良好的基因材料。