转OsDUF500基因水稻对白叶枯病的抗性分析及转OsWKY30基因烟草的耐旱性分析

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jpyssy
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实验室前期的芯片数据显示,OsDUF500是一个上调表达基因,与水稻抗病性相关。本实验以水稻NJH12的cDNA为模板,克隆到了DUF500的保守功能区。序列分析表明,OsDUF500是DUF500家族成员,功能未知。构建OsDUF500的沉默载体,用根癌土壤杆菌介导的方法转化以粳稻R109,用Hpt抗生素做抗性筛选,获得沉默株系ABD。与野生型相比,沉默株系ABD株高变矮,叶片变短,出现白色空秕谷。水稻白叶枯病抗性鉴定结果表明,转基因水稻不同株系对水稻白叶枯的抗性存在差异,沉默株系ABD的病斑长度比野生型明显缩短,病斑面积均在30%以下,株系-ABD-3和ABD-5病斑面积分别为12.3%和15.7%,对水稻白叶枯病有较好的抗性,推测OsDUF500可能对水稻白叶枯病抗性起负调控作用。
  OsWRKY30是水稻中的一个WRKY转录因子,含有2个WRKY结构域,属于WRKY家族第1组的成员。将从水稻中克隆到的WRKY-30基因构建超表达载体UWN-和沉默载体UAEBN,利用农杆菌介导的叶盘转化法将OsVVRKY30基因导入烟草中。PCR和PCR-Southern杂交检测表明OsWRKY30已经整合到烟草基因组中,RT-PCR验证表明该基因在烟草中可以正常表达。TO代阳性转基因烟草耐旱性分析结果表明,在相同的胁迫条件下,超表达株系UWN的叶绿素含量、可溶性糖、游离脯氨酸含量均高于沉默株系UAEBN及对照WT烟草。干旱胁迫lOd时,超表达株系UWN的可溶性糖含量显著高于沉默株系UAEBN和对照WT。干旱胁迫13d时,超表达株系UWN的脯氨酸含量和MDA含量与对照相比差异显著。以上研究结果表明,超表达OsWRKY30基因可以提高烟草的耐旱性。
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