载20(S)原人参二醇纳米纤维抗喉癌作用的研究

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目的:研究以静电纺丝法制备的载20(S)-原人参二醇(protopanaxadiol,PPD)的聚己内酯(polycaprolactone,PCL)纳米纤维膜对喉恶性肿瘤的体内外抑制作用,探讨电纺纳米纤维膜作为PPD的抗肿瘤载体是否可行。方法:采用静电纺丝法,以六氟异丙醇为溶剂,制备出担载PPD的PCL纳米纤维膜,用扫描电镜观察载入不同浓度PPD时纤维直径及形态的变化;采用热分析仪及万能力学试验机分别检测纤维膜的热稳定性和力学性能;傅立叶红外光谱仪对载药纳米纤维膜进行定性分析;体外降解实验研究载药纳米纤维膜是否具有生物降解性;高效液相色谱仪用于研究载药纳米纤维膜的体外药物释放特性;MTT法检测载药纳米纤维膜对人喉癌细胞(Hep-2)的毒性作用;Annexin V-EGFP/PI双染法检测体外药物作用下Hep-2细胞的凋亡情况;制备BALB/c裸鼠Hep-2皮下肿瘤模型,研究纳米纤维膜的体内抗肿瘤效果。结果:(1)扫描电子显微镜观察到载药纳米纤维表面光滑,纤维直径随着载入药物浓度的增加而增大。(2)热重分析显示载药纳米纤维膜和未载药纳米纤维膜的重量损失均在300-350℃之间;力学测试结果显示载入药物浓度未超过10%时,纳米纤维的断裂应力呈上升趋势,超过10%时,断裂应力下降;傅立叶红外光谱显示载药纳米纤维膜红外光谱中包含PPD和PCL两者的官能团吸收峰,且没有新的官能团吸收峰出现。(3)体外降解实验发现当纳米纤维浸入磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)中15天时,纳米纤维出现变形、断裂现象。(4)药物体外释放实验结果显示不同浓度的载药纳米纤维膜在最初的12h均发生突释,随后药物释放呈缓慢上升趋势。(5)MTT实验结果表明肿瘤细胞的存活率随着给药浓度的增加而降低。给药浓度达到30μg/ml,作用1天时,裸药PPD组的细胞毒性超过载药纳米纤维组,统计学分析两者之间有显著差异(p<0.01),当作用时间达到3天时,载药纳米纤维膜组的细胞存活率低于裸药PPD组(p<0.01);细胞凋亡实验结果表明空白组、PPD组、载药纳米纤维膜组的细胞凋亡率分别为2.6±0.4、16.8±2.1、29.9±2.4,各组之间均有显著统计学差异(p<0.01)。(6)动物实验显示药物作用9天后,空白组和PCL纳米纤维膜组瘤体体积和质量之间无显著差异(p>0.05),裸药PPD组和载药纳米纤维膜组相比于前两组肿瘤体积及重量均显著降低(p<0.01)。结论:(1)实验成功制备出载药纳米纤维,且具有良好的热稳定性和力学性能;合成过程中无新物质生成,推测PPD载入纳米纤维后不会改变其原有的功能。(2)载药纳米纤维膜可生物降解,可缓慢的进行药物释放。(3)细胞和动物实验表明该纳米纤维膜具有良好的体内外抗肿瘤效果,说明PCL纳米纤维膜作为PPD的载体抗肿瘤具有可行性,可以进行更深入的研究。
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