草莓重茬病原菌的分离及其拮抗菌的筛选与应用

来源 :长江大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:jemi0926
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为节省生产成本,利用大棚设施连年栽培草莓在一些地方很普遍,相应地也产生了较严重的草莓重茬病。本文通过对山东省临沂市典型草莓种植大棚进行取样分析,旨在明确草莓根腐病病原菌的种类及其生物学特性,为生物防控草莓根腐病提供科学依据。采用的研究方法是:以草莓根腐病病原菌为靶标病原菌,采用生物防治的方法进行拮抗菌的筛选,并对筛选的拮抗菌进行鉴定及生物学特性研究,将拮抗菌应用于盆栽试验和大田试验中,对拮抗菌的抗病促生效果进行了初步评价。先将主要研究结果如下:1)在发病草莓大棚采集大量发病植株,采用组织分离法获得菌株ZH-G01,纯化后通过形态学特征结合r DNA-ITS序列分析,对菌株ZH-G01进行鉴定,结果表明:菌株ZH-G01平皿菌落正面呈白色丝绒状,未产生色素,背面略微发黄,分生孢子4隔5个细胞,纺锤状,中心3个褐色异色胞,顶部具有3根或4根附属丝,尾部1根附属丝;菌株ZH-G01的ITS序列与Gen Bank中新棒状拟盘多毛孢Neopestalotiopsis clavispora的相似性达99%以上,结合形态学与分子生物学特征将病原菌鉴定为新棒状拟盘多毛孢,Gen Bank登录号为MN559410。其生物学特性研究结果表明,该菌株最适培养基为PDA培养基,孢子培养液能使其快速、大量产孢,最适生长温度为25℃,最适p H值范围为4.0~10.0,光照对菌丝生长无显著影响,最适碳源为可溶性淀粉,对木糖醇利用效果最差;最适氮源为酵母膏,对尿素的利用效果最差。2)以ZH-G01为靶标病原菌,为了获得效果较好的拮抗菌,采用平皿对峙法将72株拮抗菌进行初筛和复筛,筛选出3株生防效果好的菌株,对抑菌圈边缘菌丝进行10×4倍和10×10倍的显微镜观察,发现抑菌圈边缘菌丝出现变细、扭曲、分支增多等畸形现象。根据形态学、生理生化特性及分子生物学鉴定3株拮抗菌为解淀粉芽胞杆菌17#(Bacillus amyloliquefacen-17)贝莱斯芽胞杆菌27#(Bacillus velezensis-27)和枯草芽胞杆菌Y1-7(Bacillus subtilis-Y1-7)。拮抗菌17#对杆菌肽、氨苄西林和阿莫西林不敏感,最适培养条件为:温度32℃,装液量50ml(250ml三角瓶),初始p H6-7,碳源为葡萄糖,氮源为酵母粉;拮抗菌27#对杆菌肽和多粘菌素B不敏感,最适培养条件为:温度30℃,装液量50ml(250ml三角瓶),初始p H6-7,碳源为可溶性淀粉,氮源为酵母粉;拮抗菌Y1-7对杆菌肽和氨苄西林不敏感,最适培养条件为:温度30℃,装液量25ml(250ml三角瓶),初始p H6-7,碳源为葡萄糖,氮源为酵母粉。3)对三株拮抗菌进行广谱性验证试验,发现三株拮抗菌对茄腐镰刀菌、草莓灰霉病菌、苹果轮纹病菌、黄瓜霜霉病菌、西瓜枯萎病菌和小麦赤霉病菌均有不同程度的抑制作用,三株生防菌均有解磷效果,且产生促生物质IAA和铁载体,拮抗菌株胞外粗提物具有拮抗靶标病原菌ZH-G01的效果,以上结果初步证明三株生防菌均具有促生抗病潜力。4)盆栽试验表明,同一生防菌的防病效果优于抗病效果,复合菌的防病促生效果优于单一菌株,防治效果高达73.68%。田间试验表明,复合菌处理的防病、促生、增产及提升果实品质效果较单一菌株处理更好,防治效果高达57.18%-66.00%,每公顷增产12.97%-37.99%;与不加菌处理相比,复合菌处理株高增长了17.84%-26.04%,单株叶片数增长了40.28%-56.86%,叶面积增大了7.51%-31.00%,开花结果数增长了37.93%-52.94%;同时,复合菌可显著提高草莓果实的可溶性糖和维生素C含量,相比于不加菌处理,可溶性糖含量增长了17.99%-19.69%,维生素C含量增加了23%左右,草莓果实总酸含量降低了16.33%-37.79%,对花青苷含量无影响。
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