阿萨希毛孢子菌体外抗氧化诱导及其生物学特性研究

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研究背景及目的真菌抗氧化应激与其感染机制密切相关,也是近年来的研究热点。获得稳定的抗氧化菌株是深入研究其抗氧化机制的前提。阿萨希毛孢子菌Trichosporon asahii(T.asahii)是重要的条件致病菌,其感染机制的相关研究匮乏。本实验研究体外能否用常用氧化剂过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)和亚硫酸氢钠甲萘醌(menadione sodium bisulfate,MSB)诱导T.asahii产生抗氧化性,以及诱导获得的抗氧化表型的稳定性,并观察诱导前后菌株的生理学特性变化。方法1.将T.asahii临床标准株CBS2479和环境株CBS8904在H202或MSB浓度逐渐梯级倍增的YPD液体培养基中传代,直至无法诱导为止。取诱导终末代菌株在不含氧化剂的YPD液体培养基中连续传代10次,进行诱导回复。测定诱导前、诱导终末代、回复终末代等不同阶段菌株的过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,并应用SPSS20.0软件分析酶学检测数据。2.取诱导前、诱导终末代、回复终末代的菌株行肉眼形态和光镜下形态观察。3.参照美国临床和实验室标准协会推荐的M27-A3标准测定两种氧化剂诱导前、诱导中期、诱导末期、回复中期、回复末期的菌株对抗真菌药氟康唑的MIC值和对氧化剂H2O2和MSB的MIC值。结果1.抗氧化酶活性变化测定经H2O2诱导后,CBS2479菌株诱导末期的CAT值、SOD值分别比诱导前升高了约2.15、2.97倍;CBS8904菌株诱导末期的CAT值、SOD值分别比诱导前升高了约1.79、1.79倍。经MSB诱导后,CBS2479菌株诱导末期的CAT值、SOD值各比诱导前上升了约3.36、2.68倍;CBS8904菌株诱导末期的CAT值、SOD值分别比诱导前升高了约2.27、2.57倍。经H202和MSB诱导后,CBS2479菌株的CAT和SOD活性均显著升高(P<0.05)。回复后的 CAT、SOD 均比诱导前高(P<0.05)。CBS2479-H2O2、CBS2479-MSB菌株回复后的CAT比诱导末期下降(P<0.05),而SOD则无统计学差异。经H2O2和MSB诱导后,CBS8904菌株的CAT和SOD活性均比诱导前升高(P<0.05)。CBS8904-H2O2菌株回复后的SOD比诱导前高(P<0.05),但回复后CAT与诱导前比较无统计学差异(P>0.05)。CBS8904-MSB菌株回复后的CAT和SOD值均比诱导前升高(P<0.05)。CBS8904-H2O2、CBS8904-MSB菌株回复后的CAT、CBS8904-MSB菌株回复后的SOD均比诱导末期下降(P<0.05),而CBS8904-H2O2菌株回复后的SOD与诱导末期相比无统计学差异(P>0.05)。2.形态学变化诱导后菌落肉眼形态发生一定改变;光镜下可见CBS2479、CBS8904分别由诱导前的菌丝状、孢子状变为诱导后呈假菌丝与孢子混合状态。3.药物敏感性变化测定T.asahii分别在H202、MSB浓度梯级倍增的YPD液体培养基中培养,经过4次传代后,CBS2479-H2O2、CBS8904-H2O2、CBS2479-MSB、CBS8904-MSB菌株对氟康唑、H2O2和MSB的MIC值均为诱导前MIC值的2倍。经历回复性实验以后,CBS8904-H2O2、CBS8904-MSB菌株的MICH2O2均恢复到诱导前水平,但其余均与诱导第4代的MIC值相同。结论1.利用浓度梯级倍增的H202、MSB均能成功诱导出具有抗氧化表型的T.asahii菌株,且该表型相对稳定。2.各菌株菌落诱导后肉眼形态和镜下形态发生一定改变,且诱导后的菌株光镜下出现假菌丝与孢子混合状态。3.诱导后的菌株对氟康唑的耐受力较前升高,且诱导后的菌株均对H2O2、MSB的耐受力较前提高。
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