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低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)和氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)对能够与其特异性结合的细菌具有调理素功能。革兰氏阴性菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)除了引发肺炎等病人的继发感染,还会引起动脉粥样硬化等并发症。P.aeruginosa能够与LDL/oxLDL发生特异性结合,然而有关LDL/oxLDL对该菌是否具有调理素作用以及机理目前尚无研究数据。此方面研究可能有助于揭示该菌导致动脉粥样硬化等疾病机制。本论文针对LDL/oxLDL介导吞噬细胞吞噬P.aeruginosa及其相关机理进行了研究,主要研究内容及结果如下:1.LDL/oxLDL与P.aeruginosa 结合模型的建立。通过ELISA的方法检测了LDL/oxLDL可以与P.aeruginosa 特异性结合而不与E.coli结合。同时证明了不同生长期的P.aeruginosa与LDL/oxLDL相互结合无显著差异。2.LDL/oxLDL促进U937细胞吞噬P.aeruginosa的调理吞噬实验。采用平板菌落计数、荧光显微镜照相两种手段,证实了LDL/oxLDL(100μg/mL)可以作为调理素介导U937细胞对P.aeruginosa的吞噬。与不加LDL/oxLDL的对照组相比,在U937细胞、P.Raeruginosa以及LDL/oxLDL(100μig/mL)共孵育15 min和30 min时,LDL/oxLDL可以使U937细胞对P.aeruginosa 的吞噬效率分别增加22.71%和32.9%。而阴性对照组菌株E.coli由于不能与LDL/oxLDL结合形成LDL/oxLDL-E.coli复合体,因此加LDL/oxLDL不能促进U937细胞对E.coli的吞噬。U937细胞表面的CD36是主要的LDL/oxLDL受体,因此本实验研究了CD36作为调理素受体的功能。用抗CD36单克隆抗体封闭细胞表面CD36受体后,LDL/oxLDL介导的调理吞噬功能被显著抑制,证实参与这一调理吞噬作用的调理素受体是CD36受体。另外,本文研究了不同浓度LDL/oxLDL(100μg/mL、1000μg/mL)对U937细胞吞噬P.aeruginosa的影响,结果表明,生理浓度下(100μg/mL)LDL/oxLDL也可以发挥显著的调理素功能。3.与LDL/oxLDL特异性结合RahU蛋白作为P.aeruginosa表面LDL/oxLDL受体的研究。通过基因克隆重组表达技术得到P.aeruginosa的rRahU蛋白,ELISA实验验证了rRahU蛋白与LDL/oxLDL的结合存在特异性。利用同源重组的方法,将P.aeruginosa(CMCC10104)基因组中编码RahU蛋白的基因敲除,构建了RahU基因缺失的P.ae-ruginosa菌株(ARahU菌株)。制备小鼠抗rRahU蛋白抗体,分别提取野生型及突变型P.aeruginosa菌株膜蛋白,Western-Blot技术研究证实抗rRahU抗体可以与野生型P.aeruginosa菌株的细胞膜蛋白相互作用而不与ARahU菌株细胞膜蛋白成分相互作用。应用ELISA技术证实小鼠抗rRahU蛋白抗体与野生型P.aeruginosa菌株特异性结合而不与ARahU菌株结合。以上实验证实,本研究所使用P.aeruginosa(CMCC10104)的RahU蛋白为细胞膜表达蛋白,且敲除后在细胞膜上消失。为了验证RahU蛋白作为P.aeruginosa表面LDL/oxLDL配体的作用,本研究通过ELISA实验检测了△RahU菌株与LDL/oxLDL的结合能力的变化,发现野生型P.aeruginP.和△RahU菌株与LDL/oxLDL的亲和力无显著差异。研究结果表明,RahU蛋白可以与LDL/oxLDL特异性结合,且为P.aeruginosa细胞膜表面蛋白,基因敲除该蛋白后P.aeruginosa与LDL/oxLDL结合能力没有显著降低,可能还有其他的配体参与该过程。综上,本研究首次证明了LDL/oxLDL可以发挥调理素功能介导吞噬细胞对革兰氏阴性菌P.aeruginosa的吞噬,并且首次对RahU蛋白作为LDL/oxLDL配体的作用进行了验证,实验证实P.aeruginosa表面还有其它LDL/oxLDL配体,还需要进一步研究。